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细菌过氧化氢检测试剂盒(H2O2检测)-绿色荧光
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详细内容
细菌过氧化氢检测试剂盒(H2O2检测)-绿色荧光
产品货号:XY9-46118
产品规格及价格:100T/1600元;200T/2700元
产品简介:
细菌过氧化氢检测试剂盒(H2O2 检测)- 绿色荧光是一种利用荧光探针检测细菌内过氧化氢含量的试剂盒,以下是相关介绍:
检测原理
该类试剂盒通常利用过氧化氢特异性荧光探针,这些探针是苯蒽类荧光探针,能自由穿过细胞膜,进入细胞内后与过氧化氢反应,被氧化生成绿色荧光物质,绿色荧光强度与细胞内过氧化氢水平成正比。在激发波长 488nm,发射波长 526nm 附近,使用荧光显微镜、激光共聚焦显微镜等仪器检测绿色荧光,即可测定细胞内过氧化氢水平。

操作方法
探针配制:根据样本数量计算用量,用试剂 B 探针稀释液 5 倍稀释过氧化氢 O16 探针后充分混匀,避光保存备用,再用无血清培养基或 HBSS 缓冲盐溶液稀释 100-200 倍至染色所需的工作液浓度。
探针标记:对于悬浮细胞或贴壁细胞消化处理后的情况,先按照 1:500-1000 用无血清培养基稀释探针,离心移除培养基,用 PBS 洗细胞一次,将细胞收集后悬浮于稀释好的探针中,细胞浓度为 1×106-2×107 / 毫升,在 37℃细胞培养箱内避光孵育 20-60 分钟,每隔 3-5 分钟颠倒混匀一下,使探针和细胞充分接触,用无血清细胞培养基洗涤细胞三次,以充分去除未进入细胞内的探针,并用无血清细胞培养基重悬细胞。
检测:使用荧光显微镜观察时,对贴壁生长细胞或活组织,可直接在荧光显微镜下观察;对悬浮生长细胞,取 25-50µl 细胞悬液滴到一张显微载玻片上,再盖上一张盖玻片进行观察。若用流式细胞仪分析,对贴壁生长细胞,用胰酶消化制备成单细胞悬液;对悬浮生长细胞,直接收集细胞,用 0.5-1ml 冰冷 PBS 重悬细胞,采用 488nm 波长激发,测定待测细胞平均荧光强度。
注意事项
试剂盒需在 - 20℃避光保存,探针从冰箱取出后需恢复至室温或 37℃短时间水浴,变成液体状态后离心至管底部再开盖。
螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心,将盖和管内壁上的液体离心至管底,避免开盖时试剂损失。
荧光探针标记后,一定要洗净残余的未进入细胞内的探针,否则会导致背景较高。
探针标记完毕并洗净残余探针后,可以进行激发波长的扫描和发射波长的扫描,以确认探针的标记情况是否正常。
尽量缩短探针标记后到测定所用的时间,以减少各种可能的误差。
过氧化氢探针在光照和空气中易被氧化,注意避光密封保存,染色工作液必须现配现用,并且在当天用完。
仅用于科研,不能用于临床诊断!所有产品仅供科研使用,不得用于人或动物的治疗等任何其他用途,不为任何个人提供产品和服务。以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。
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