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切片活性氧检测试剂盒(ROS)-绿色荧光
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详细内容
切片活性氧检测试剂盒(ROS)-绿色荧光
产品货号:XY9-460513
产品规格及价格:100T/1600元;200T/2700元
产品简介:
组织切片活性氧检测试剂盒是一种利用荧光探针 O06进行活性氧检测的试剂盒。
O06是一种细胞膜通透性的荧光探针,O06本身荧光极低,被活性氧特异性氧化生成绿色荧光物质,绿色荧光强度与活性氧水平成正比,检测绿色荧光强度就可以知道组织内活性氧的水平。
在激发波长500 nm,发射波长525 nm附近,使用激光共聚焦/荧光显微镜检测绿色荧光强度,从而测定组织内活性氧水平。利用本试剂盒可以快速定性检测样本内活性氧水平变化差异。
产品应用:
1.激光共聚焦显微镜
2.荧光显微镜
产品特点:
1.使用方便:可用荧光显微镜直接观察;
2.背景低,灵敏度高;
3.线性范围宽,使用方便。

使用方法:
1.螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心,将盖内壁上的液体收集至管底,避免开盖时液体洒落。
2.尽量缩短探针标记后到测定所用的时间,以减少各种可能的误差。
3.对于某些样本,如果荧光太强,可以按照 1:200-1:1000 稀释探针。探针标记的时间也可以根据情况在 20-60分钟内适当进行调整。
4.冰冻切片制作不需要经过固定脱水包埋等步骤,直接冷冻后切片贴片。
5.有条件也可以采用振动切片的方法。有些方便处理的样品类型也可以采用徒手切片。
6.以下操作步骤仅供参考,请根据实际样本情况调整。
一、 试剂配制
1. 根据样本数,用纯水将 BBoxiProbe® O06 活性氧荧光探针 200 倍稀释,配成染色工作液。
2. 用纯水将 10X 清洗液 10 倍稀释,配成 1X 清洗液工作液。
二、 探针标记
1. 准备待测的厚为 10-20 µm 的未经固定处理的冰冻切片。
2. 在待测样本上滴加 100-200 µl 染色工作液,在 37℃培养箱避光孵育 20-60 分钟。
3. 移除染色液。
4. 用清洗液工作液洗涤切片 2-3 次。室温下,小心加上 200 µl 清洗液工作液,铺满整个切片表面,
静置 1-2 分钟。
5. 小心吸除清洗液。晾干。
6. 加盖玻片或甘油封片。
7. 荧光显微镜检测。
常见问题分析:
1.活性氧结果如何分析?
ROS 是多种物质的统称,不像某一单一活性氧指标,无法检测其绝对的含量,只能通过设置参照样本,以参照样本的倍数来反映目标样本相对含量变化,这个“相对”是针对参照的。
分析结果是定性的,也是没有单位的,因为它本质上是一个比值(目标/参照)。反映的是模型样本通过具体的干预措施(如养分缺失、缺氧、药物治疗或遗传基因操控等)如何影响其 ROS 的变化,测定其 ROS 是增加或者降低了。
2.荧光照片如何分析?
需要有相关的荧光强度分析软件。ROS 表达水平直接通过荧光信号的强弱和分布范围来体现。
有的显微镜扫描下来的图像本身就可以测面积和强度,可以同时测不同颜色的荧光强度。有的显微镜不支持此功能,可以将荧光染色彩色图像转换为黑白的灰度图,然后再以灰度值作为测量指标进行分析。
要结合明场的照片具体分析。如果细胞分布均匀可以算固定面积荧光强度。成像时中心和四周有差异时,一般将四周剪切掉也可以。如果细胞分布不匀,需要找到细胞分布匀称的视野,一个视野一个视野找。
如果要用图片做结果,就要平行做多个图片,作分析,统计,每张都要求荧光分布尽量一致。
为了去除杂光的影响,可以适当调节统计荧光的强度范围,将信号过弱的背景杂光去除掉。
对照组和实验组整张图片需要做同样的处理,保证所有参数均要一致。
对于不同情况荧光强度的统计方法,根据实验需要或参考文献。可以算等面积的平均强度;也可以算阈值高于一定值的平均强度;也可以算荧光的累积而不算平均。要根据课题需要选择合适的测量统计方法。
3.荧光照片效果不好?
荧光拍照存在很多变量,每一个变量都会严重影响拍照效果。
荧光拍摄条件:拍摄环境、显微镜品牌和激发荧光决定了镜下观察的效果。同样的操作方法和切片,在不同品牌显微镜下显示出完全不同的荧光强度。
荧光衰减:荧光物质的衰减通常都是非常明显的。同样的一组切片,1 小时内拍摄和 8 小时后拍摄,荧光效果完全不同。
用激光共聚焦显微镜,激光共聚焦显微镜的分辨率比普通荧光显微镜要高的多,通常同一张片子激光共聚焦的更优。
仅用于科研,不能用于临床诊断!所有产品仅供科研使用,不得用于人或动物的治疗等任何其他用途,不为任何个人提供产品和服务。以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。
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