Bay 60-7550

MCE 国际站：Bay 60-7550

CAS：439083-90-6

品牌：MedChemExpress (MCE)

存储条件：Powder: -20°C, 3 years; 4°C, 2 years.In solvent: -80°C, 6 months; -20°C, 1 month.

生物活性：Bay 60-7550 是一种有效的选择性 PDE2 抑制剂，K_i 为 3.8 nM。 IC50 和目标：Ki：3.8±0.2 nM (PDE2)^[1] 体外： Bay 60-7550 (1 μM) 增加 cGMP在神经元培养物中与对照相比 [F(6,14)=12.97，Bay 60-7550 的 p<0.05]。与单独的 NMDA 相比，Bay 60-7550 在 NMDA (30 μM) 存在的情况下导致 cGMP 进一步增加。 NMDA 受体拮抗剂 MK-801 (10 μM) 可阻断神经元培养物中 Bay 60-7550+NMDA 诱导的 cGMP 升高^[1]。与未处理的对照细胞相比，BAY 60-7550 (1 μM)^[2] 显着降低了 IPAH 患者的 PASMCs 增殖。 体内：PDE2 抑制剂 Bay 60-7550（1 毫克/千克）可逆转束缚应激引起的行为改变，从而增加张开手臂进入和开放的百分比- 与车辆 + 约束压力条件相比的准备时间。在非应激小鼠中，与载体治疗组相比，Bay 60-7550 的开臂进入百分比和开臂时间呈剂量依赖性增加；在 3 mg/kg 的剂量下观察到显着增加。在非应激小鼠中，与载体处理的小鼠相比，Bay 60-7550 以剂量依赖的方式增加了头部浸入的次数和头部浸入的时间；在 1 和 3 mg/kg 的剂量下观察到显着增加^[1]。

体外：与对照相比，Bay 60-7550 (1 μM) 增加神经元培养物中的 cGMP [F(6,14)=12.97，对于 Bay 60-7550，p<0.05]。与单独的 NMDA 相比，Bay 60-7550 在 NMDA (30 μM) 存在的情况下导致 cGMP 进一步增加。 NMDA 受体拮抗剂 MK-801 (10 μM) 可阻断神经元培养物中 Bay 60-7550+NMDA 诱导的 cGMP 升高^[1]。与未处理的对照细胞相比，BAY 60-7550 (1 μM)^[2] 显着降低了 IPAH 患者的 PASMCs 增殖。

体内：PDE2 抑制剂 Bay 60-7550 (1 mg/kg) 可逆转约束应力引起的行为改变，与载体 + 约束应力条件相比，导致张开臂进入百分比和张开臂时间增加。在非应激小鼠中，与载体治疗组相比，Bay 60-7550 的开臂进入百分比和开臂时间呈剂量依赖性增加；在 3 mg/kg 的剂量下观察到显着增加。在非应激小鼠中，与载体处理的小鼠相比，Bay 60-7550 以剂量依赖的方式增加了头部浸入的次数和头部浸入的时间；在 1 和 3 mg/kg 的剂量下观察到显着增加^[1]。

激酶试验：COS-7细胞在37°C、5% CO2气氛下维持在完全DMEM（含有10%胎牛血清、100单位/mL青霉素G、100 mg/mL链霉素和400 μM L-丙氨酰-L-谷氨酰胺）中。使用 FuGENE6 转染试剂将 PDE2 表达质粒引入 COS-7 细胞。细胞在溶解缓冲液（275 mM NaCl、1.5 mM MgCl2、2 mM EGTA、2% Triton X、20% 甘油和 40 mM Tris-HCl）中裂解，细胞裂解液用于免疫沉淀程序。将蛋白 A-琼脂糖珠浆 (100 μL) 用冰冷的磷酸盐缓冲盐水（100 mM NaCl、2.7 mM KCl、10.6 mM Na2HPO4 和 1.6 mM NaH2PO4）洗涤 3 次，并与 5 μg PDE2 抗体混合和 100 μL (2 μg/μL) 裂解液样品，并在 4°C 下旋转过夜。然后将珠子/样品混合物以 1000g 离心，将珠子与上清液分离。将珠子重悬于 100 μL 冰冷的裂解缓冲液中（20 mM Tris，pH 7.4，140 mM NaCl，0.75 mM MgCl2，1 mM EGTA，1% Triton X-100 和 20% 甘油，含有蛋白酶和磷酸酶抑制剂) 洗脱 PDE2 以用于酶活性测定。 PDE2 活性测定完成。将源自 COS-7 细胞表达并在 KHEM 缓冲液（50 mM KCl、50 mM HEPES、10 mM EGTA 和 1.9 mM MgCl2，pH 7.2）中稀释的重组 PDE2 酶与不同浓度的 PDE2 抑制剂（Bay 60-7550）混合、ND7001 和 EHNA) 和 [3H]cGMP/cGMP (5 μM) 作为底物。然后将混合物在 37°C 下孵育 30 分钟（反应体积为 100 μL）。为了将 [3H]GMP 转化为 [3H]鸟苷，将样品与来自响尾蛇的蛇毒在 37°C 下孵育 30 分钟。然后将样品与新制备的 Dowex/水/乙醇 [1:1:1，v/v] 浆液一起涡旋，然后离心 10 分钟。然后通过液体闪烁计数对上清液中的[3H]鸟苷进行定量。 Bay 60-7550 溶解在二甲亚砜中，EHNA 溶解在蒸馏水中，ND7001 溶解在乙醇中作为 10 mM 原液，然后用 20 mM Tris（pH 7.4）稀释用于测定；各溶剂的最终浓度不影响测定。单一底物浓度下的 IC50 值通过对每种 PDE2 抑制剂的对数浓度-响应曲线的非线性回归分析来确定； Ki 值的计算[1]。

细胞试验：使用 BAY 60-7550 (1 μM)、ANP 治疗后，监测从特发性肺动脉高压 (IPAH) 患者中分离出的人远端肺动脉平滑肌细胞的生长情况，或从因疑似恶性肿瘤而接受移植或肺切除术的成人中分离出的对照细胞的生长情况。 1 μM)、DETA-NONOate (10 μM) 或曲前列环素 (1 μM)，单独或组合使用[2]。

动物体内实验:小鼠[1] 使用体重28至35克的雄性ICR小鼠。 Bay 60-7550（0.5、1 和 3 mg/kg）、ND7001（0.5、1.0 和 3 mg/kg）、Detanonoate（0.5 mg/kg）、L-NAME（50 mg/kg）或地西泮（ 1 mg/kg）在约束压力后和行为测试前 30 分钟施用。小鼠还接受 Bay 60-7550 (3 mg/kg)、ND7001 (3 mg/kg)、Detanonoate (0.5 mg/kg)、L-NAME (50 mg/kg) 或地西泮 (1 mg/kg) 治疗）在没有约束应力的情况下；行为测试前 30 分钟给药。 Bay 60-7550 对 PDE2 的选择性是 PDE1 的 50 倍，是 PDE5 的 100 倍，是其他 PDE 系列的 200 倍以上。相对于其他 PDE 家族，ND7001 对 PDE2 的抑制选择性高出至少 100 倍。对于评估 cGMP 信号传导在 PDE2 抑制剂行为影响中的作用的拮抗测试，在 Bay 60-7550 或 ND7001 之前 20 分钟施用 ODQ（一种可溶性鸟苷酸环化酶抑制剂 (20 mg/kg)）。

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研究领域：Metabolic Enzyme/Protease

作用靶点：Phosphodiesterase (PDE)

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参考文献：

[1]. Masood A, et al. Anxiolytic effects of phosphodiesterase-2 inhibitors associated with increased cGMP signaling. J Pharmacol Exp Ther. 2009 Nov;331(2):690-9.[2]. Bubb KJ, et al. Inhibition of phosphodiesterase 2 augments cGMP ａnd cAMP signaling to ameliorate pulmonary hypertension. Circulation. 2014 Aug 5;130(6):496-507.