如何预防血浆样本的微生物污染？

采血环节，采血部位皮肤规范消毒，等待酒精完全挥发再穿刺，避免消毒液混入血液。采血管选用无菌一次性成品管，不要重复使用。采血后立刻盖紧管盖，轻柔颠倒混匀，全程不打开管盖进行混匀操作。尽量避免血液洒在管口外壁，若管壁沾有血迹，用无菌纸巾擦拭干净再放入离心设备。

样本处理环境优先使用生物安全柜，没有生物安全柜则选择独立洁净操作台，远离细胞培养、细菌真菌培养区域。操作前后用 75% 乙醇擦拭台面、离心管架，待乙醇完全挥发再开始实验。全程佩戴一次性手套和口罩，不要对着管口说话、咳嗽，手套接触样本液体或台面后及时更换。所有耗材，包括离心管、移液枪枪头都使用一次性无菌产品，枪头严禁重复使用。

离心操作时，样本管保持盖紧状态再放入离心机，禁止开盖离心。离心套管提前用 75% 乙醇擦拭。离心结束等待离心机完全停稳再开盖，防止液体溅出造成交叉污染。若发生采血管破裂渗漏，该样本直接废弃，并且清洁消毒离心桶后再处理其他样本。

吸取和分装血浆时，一次只打开一份样本管，处理完毕盖好盖子再开启下一份。每处理一份样本更换新枪头，枪头只伸入管内液体，不触碰管口外壁。吸取血浆完成后快速盖紧管盖，缩短管口暴露在空气中的时间。分装小管提前标记，提前备好，减少开盖等待时间。优先按照单次实验用量进行小体积分装，减少后续反复开盖取样带来的污染风险。

样本保存环节，分装完成后尽快放到冰上，短期存放置于 2 至 8℃，尽量 24 小时内完成检测。长期保存直接放负 80℃，拧紧管盖，防止低温下渗漏。冻存样本尽量避免反复冻融，反复冻融不仅促进纤维蛋白析出，还会增加管盖缝隙微生物侵入的可能性。

样本添加抑菌剂的选择需要谨慎。如果待测抗原对蛋白酶耐受，可以考虑添加少量叠氮钠，终浓度 0.02%，能够抑制细菌增殖，但叠氮钠会抑制 HRP 酶活性，ELISA 体系绝对不能使用。所以 ELISA 血浆样本一般不推荐添加抑菌剂，依靠全程无菌操作来防控，不要依靠抑菌剂防腐。

样本质量监控，分离完成后肉眼筛查，出现浑浊、沉淀、异味的样本直接舍弃。操作时先处理低浓度样本，再处理高浓度样本，降低高值样本气溶胶带来的交叉污染。废弃枪头、废液及时密封丢弃，不要长时间堆放在操作台。

论文方法描述参考。血浆分离操作于洁净操作台内开展，操作前后使用 75% 乙醇对台面进行消毒。采血及分装所用离心管、移液枪枪头均采用一次性无菌耗材。样本管全程加盖离心，每份样本更换枪头，单次仅处理一份样本，缩短管口暴露时间。操作全程佩戴一次性手套与口罩，避免飞沫污染。分装后的血浆样本按需小体积分装，短期 2~8℃保存，长期置于 - 80℃保存，本实验不添加抑菌剂。