如何判断血浆样本是否被微生物污染？

微生物污染血浆样本，主要从肉眼观察、短期静置变化、辅助检测三个层面综合判断，微生物增殖会降解待测抗原、释放蛋白酶，还会大幅抬高 ELISA 本底、增加非特异吸附，污染样本建议直接舍弃。

肉眼外观观察，正常血浆多为淡黄色清亮液体，轻微脂血会呈乳白色，溶血样本偏红色。发生微生物污染的血浆常出现浑浊，不再透亮；部分样本会出现细小絮状物、沉淀，注意区分纤维蛋白絮和微生物沉淀，纤维蛋白絮一般拉丝感明显，微生物沉淀多为均匀雾状浑浊，放置一段时间后管底出现灰白色沉淀。严重污染样本会产生异味，轻微开盖就能闻到酸败臭味。脂血样本只是乳白、没有浑浊异味，溶血只是红色，这两类不属于微生物污染，要做好区分。

静置培养观察，将血浆样本置于 2 到 8℃或者室温放置 12 到 24 小时，正常血浆不会明显变浑浊。如果放置后浊度明显增加，管底沉淀增多，提示存在微生物增殖。这个方法简单，但耗时较长，适合批量样本筛查，不适合紧急上机的样本。注意低温放置只是观察，不能用来培养扩增污染物，判断完成后样本直接丢弃，不要继续用于 ELISA。

辅助检测方法，可按需选择。镜检，取少量血浆滴在玻片，显微镜下观察，污染样本可以看到细菌或者真菌孢子。PCR 检测，细菌通用 16S rRNA、真菌 ITS 引物 PCR，灵敏度高，可以检出低水平微生物污染，适合低污染、肉眼看不出异常的样本。平板涂布，取少量血浆涂布营养琼脂平板，恒温培养后观察菌落生长，适合确认污染类型。

还要结合 ELISA 检测结果辅助判断。如果同批次其他样本正常，唯独这份样本空白 OD 异常偏高、孔间 CV 显著变大，并且排除纤维蛋白、溶血、脂血、异嗜性抗体干扰后，就要怀疑微生物污染。微生物代谢产生的蛋白酶会降解抗原，也可能出现检测信号异常偏低，不能只看信号升高。

需要区分容易混淆的情况。纤维蛋白析出，一般刚分离时清亮，冻融之后出现丝状絮状物，没有臭味，静置不会持续变浑浊；微生物污染的浑浊会随放置时间不断加重，伴随异味。脂血样本整体乳白，静置不会产生沉淀，无异味。溶血样本颜色变红，液体依旧透亮，没有雾状浑浊。

论文描述参考。血浆样本首先通过肉眼观察外观，存在浑浊、沉淀或异味的样本判定为微生物污染。对于肉眼无明显异常的样本，可采用 16S rRNA PCR 进一步筛查微生物污染。污染样本不用于 ELISA 检测。