ELISA作为一种快速、灵敏、准确可靠的定性定量检测方法，可检测样本范围十分广泛，比如血液（血清、血浆）、组织匀浆或提取物、细胞培养等。不同类型样本的处理方法也大相径庭。如何正确处理这些样本，是确保ELISA实验准确性的步，也是实验中经常遇到并需要认真对待的问题。

「ELISA问诊室」第4期，将详细介绍血液样品的处理方法。

“抽血检查”如同中医的“望闻问切”，是我们身体健康检测的项。现代医学离不开血液检查，同样，现代科研也与血液息息相关。但是我们有时却对这一类样品懵懵懂懂，傻傻分不清全血、血清、血浆是什么？

为了便于记忆，我们先上公式：

血浆=全血-血细胞

血清=全血-（血细胞+纤维蛋白原）=血浆-纤维蛋白原

全血

全血也可以理解为血液，由血细胞（红细胞、白细胞、血小板）和血浆组成，是将血液采集到采血管内所形成的混合物。为了防止血液凝固便于后期检测，全血中须含有抗凝剂。

全血主要用于红细胞计数、分类和形态学检查，其他生化、免疫、肿瘤标记物等检测多采用血清或血浆。血清或血浆中的生理成分与机体组织间的比较接近，更能真实的反应机体生理和病理情况。

血浆

全血经抗凝处理后，通过离心沉淀获得不含细胞成分的淡黄色液体称为血浆。血浆蛋白是多种蛋白质的总称，如白蛋白、球蛋白、纤维蛋白原，以及凝血因子等。常应用于血浆生理性和病理性化学成分的测定，特别是凝血因子检测。

血浆的处理步骤主要为：

➢ 将全血收集到无菌的含抗凝剂的试管中，轻轻混匀。

➢ 4℃，3000rpm离心10-20分钟。

➢ 取上清，弃沉淀。

➢ 立即取适量血浆进行检测，或分装冻存于-20℃或-80℃。

血浆需要抗凝，常用的抗凝剂有EDTA钠盐、肝素钠、枸橼酸纳或柠檬酸钠。检测前请仔细阅读ELISA试剂盒说明书，查看该试剂盒针对抗凝剂是否有特殊要求。

血清

血液不加抗凝剂自然凝固后，离心分离出来的淡黄色透明液体称之为血清。血清中不含纤维蛋白原和凝血因子。适用于临床化学和免疫学检查，如肿瘤标记物、丙氨酸氨基转移酶、血清蛋白等。

血清是ELISA实验常用的样本之一，其预处理过程也比较简单。

基本操作步骤如下：

✔ 用真空采血针采集新鲜血液2mL，加入无菌试管或离心管中。

✔ 将试管或离心管在室温放置1-2小时或4℃过夜。血液自然凝固过程与温度有关，温度越低凝聚越缓慢。

✔ 4℃，3000rpm离心10-20分钟。

✔ 取上清，弃沉淀。

✔ 根据实验需要，取适量上清进行ELISA检测。

✔ 剩余上清可分装冻存于-20℃或-80℃。分装是为了避免反复冻融。如出现沉淀需再次离心。

在进行血液样本处理时，要注意以下几点：

✦ 血液样本宜在新鲜时检测，一般不超过24小时，不建议在冰箱中保存过久。

✦ 收集和处理时要避免红细胞破裂，发生溶血。因为红细胞溶解会释放具有过氧化物酶活性的影响，影响HRP的显色反应，导致结果不准确，出现假阳性。

✦ 整个过程还要避免细菌污染，因为细菌可能含有内源性HRP，会产生假阳性。

✦ 不使用高血脂的样本。

✦ 避免样本反复冻融。所有样本收集后，应及时分装并储存于-20℃或-80℃。在检测前，冻存样本应缓慢恢复至室温。轻柔的混匀。如果有可见的沉淀需要再次离心去除。

通过血清和血浆的处理方式来看，两者之间差别不大。血清是全血通过纤维蛋白和凝血因子自然凝固后的上清，因此不含纤维蛋白原和一些凝血因子。血浆是全血中加了抗凝剂，保留了纤维蛋白原和凝血因子。

那么，在ELISA实验中应该选择血清还是血浆呢？没有“一刀切”的答案。需要根据实验的具体检测项目来定，比如实验室条件、检测指标、样本量、历史参照等。但是建议在同一个实验中不要同时用这两种基质，因为血清和血浆的浓度不一样。

课外阅读

实验室常用的抗凝剂主要有EDTA盐、枸橼酸钠及肝素。其他抗凝剂如草酸钾用的相对少一些。根据待检目标物的性质不同需要选择不同的抗凝剂，接下来我们对常用的3种抗凝剂进行了对比分析

留个作业：

血液样品是ELISA检测常用实验对象，在实验开启时，要根据检测项选择合适的样品形式，以及选择合适的抗凝剂。欢迎大家在评论区说一说你的心得体会！