钩端螺旋体IgG抗体检测试剂盒（酶联免疫法）

说明书

作者编辑：【深圳市恒昊生物科技有限公司】

【产品名称】

通用名：钩端螺旋体IgG抗体检测试剂盒（酶联免疫法）

【包装规格】192人份/盒

【预期用途】

该产品用于定性检测人血清或血浆中存在钩体IgG抗体。

【检验原理】

试剂盒微孔板涂有来自钩体抗原，在与稀释的患者血清的次孵育期间，任何与抗原发生反应的抗体都会与包被的孔结合。清洗除去样品的其余部分后，添加酶缀合物。如果抗体已与孔结合，则酶结合物将与这些抗体结合。另一系列洗涤后，添加色原（四甲基联苯胺或TMB）。如果存在酶结合物，过氧化物酶将催化消耗过氧化物的反应，并将色原从透明变为蓝色。添加终止溶液终止反应并将蓝色变为亮黄色。然后可以目视或使用ELISA酶标仪读取OD值。生物素系统（biotin-avidinsystem）的稳固级联放大作用，使试剂的特异性、灵敏度、稳定性极大地提高。

【主要组成成份】

【贮存条件及有效期】

2-8℃密封保存，避免冻结。有效期12个月。

【适用仪器】

各类国产和进口酶标仪均可使用，检测波长450nm。

【样本要求】

1、尽量用新鲜标本，如需保存，可于2-8℃冷藏48小时或-20℃冻存4周（样本应避光）。避免反复冻融（3次以上）

2、避免用溶血、混浊或脂血标本。

3、样本若需运输，应保持2-8℃或冻存状态。

4、标本中避免加入抗凝剂或保护剂或防腐剂，以免影响试验结果。

【检验方法】

1、试剂盒平衡至室温后取出反应板拆封。

2、将浓缩洗涤液用蒸馏水1：20稀释待用（如：1ml浓缩洗涤液---19ml蒸馏水）。

3、加样：将待检标本用标本稀释液1：100稀释（如：5ul标本---495ul标本稀释液），于反应板中加已稀释待检标本及阴、阳性对照（100ul）各一孔；设空白对照一孔（加100ul标本稀释液）轻拍混匀。

4、孵育：室温温育30分钟。

5、洗板：甩去孔内液体，每孔加满（或350ul）洗涤液，静置10-15秒，甩净，在吸水纸上拍干，同法连续洗板5次。或使用自动化设备前需要设置好对应参数。

6、加酶结合物：每孔100ul，混匀后置室温温育10分钟。同上法洗涤5次并拍干。

7、显色：每孔加显色剂TMB100ul，轻拍混匀（或震荡器混匀）后置室温10分钟。

8、终止：每孔加入终止液100ul，轻拍混匀（或震荡器混匀）。

9、结果判读：酶标仪双波长450nm/620-650nm读取数值，其中450nm为主波长。【检验结果的解释】

1、目测：在白色背景下观察各孔显色情况，黄色者为阳性，无色者为阴性。

2、酶标仪测定：每孔加终止液100ul，混匀后在450nm波长下以空白孔调零后测定各孔O.D值。

阴性对照OD≤0.15；阳性对照OD≥0.3；阳性标本：OD≥0.25；阴性标本OD＜0.25。

阴性对照OD值≤0.15，阳性对照≥0.30。以上实验结果成立，否则实验可能产生偏差，需重新试验。

【阳性判断值或者参考区间】

正常健康人应为阴性。即待测标本OD值≥0.25为阳性。

【检验方法的局限性】

1、本试剂盒检测结果只作为辅助诊断，疾病的确诊需要结合临床症状/体征和其他检查方法方可做出判断。

【产品性能指标】

1、灵敏度：检测30份阳性标本，检测结果为阳性有29份，灵敏度为96%。

2、特异性：检测53份阴性标本，检测结果为阴性有43份，灵敏度为81%。

3、批内差：同一批次的试剂，对一份阳性血清进行测定，各板孔对测定结果的变异系数小于15%。

【注意事项】

1、试剂盒仅供体外诊断用。

2、微孔板须密封防潮，从冷藏环境中取出时，应置室温平衡至潮气尽干后方可开启使用，余者封存置2-8℃短期内用完。

3、滴加试剂前应将滴瓶翻转数次混匀，滴加时保持瓶身垂直。

4、洗涤时每孔均须加满，防止孔内有游离酶不能洗净。

5、试剂置2-8℃存放，不能冻结。

6、本试剂盒中阴阳性对照虽不含人源性血清成分，但应严格按常规作为污染物处理。

【参考文献】

1.凯利·PW.钩端螺旋体病。在，内科和外科传染病。GorbachS、BartlettJ、BalcklowN，（编辑）：费城，Saunders，1991年，第1295-1302页。

2.里贝罗MA、阿西斯CSN、罗梅罗EC。使用免疫显性抗原对人钩端螺旋体病进行血清诊断。血清诊断。免疫疗法。感染。疾病1994；6：140-144。

3.特纳LH.钩端螺旋体病II。跨。皇家社会学会。特罗普。医学。&卫生1968；62：880-889。

4.帕帕斯MG、巴卢WR、格雷MR等。等人。使用IgM特异性点ELISA快速血清诊断钩端螺旋体病：与显微镜凝集试验的比较。美国热带医学杂志1985；34（2）：346-354。

5.AlderB、MurphyAM、LocarniniSA等人。固相酶联免疫吸附试验检测人血清中特异性抗钩端螺旋体免疫球蛋白M和免疫球蛋白G。

J.克林。微1980；11：452-457。

6.CincoM、BalanziniD、BanfiE。意大利钩端螺旋体病诊断免疫酶试验(ELISA)的评估。欧元。J.流行病学1992；8：677-682。

7.里贝罗MA、苏萨CC、阿尔梅达SHP。使用免疫显性抗原对人钩端螺旋体病进行斑点ELISA。J.Trop.Med。卫生。1995；98：

452-456。

8.GussenhovenGC、vanderHoornM、GorisM等。等人。LEPTO试纸，一种用于检测人血清中钩端螺旋体特异性免疫球蛋白M抗体的试纸测定法。J.克林。微。1997；35（1）：92-97。

9.WattG、AlquizaLM、PadreLP等。等人。钩端螺旋体病的快速诊断：斑点酶联免疫吸附试验与属特异性显微凝集试验在疾病不同阶段的前瞻性比较。J.感染。迪斯。1988；157(4)840-842。

10.LevettPN、BranchSL、PaxtonH。用于检测急性钩端螺旋体病的Dot-ELISA方法的前瞻性评估。1997年第37届ICAAC（ASM）摘要；D-4：83。

【说明书批准及修改日期】2024年11月01日