无菌检查法系用于检査药典要求无菌的药品生物制品、医疗器具、原料、辅料及其他品种是否无菌的一种方法。

试验准备

无菌检验需在洁净度达到100或以上的实验室进行，并确保该实验室各项指标均符合GB50073—2001《洁净厂房设计规范》以及GB／T16292～16294—1996《医药工业洁净室(区)悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法》等相关标准。同时，洗脱液、需氧一厌氧培养基与真菌培养基的制备需遵循卫生部《消毒技术规范》(2002年版)的要求。

在无菌检验三天，需在需氧一厌氧培养基与真菌培养基中分别接种1ml洗脱液，并在适宜的温度下培养72小时，以确保无菌生长。此外，还需制备阳性对照管菌液，包括金黄色s葡萄球菌、生孢梭菌以及白念珠菌的稀释液。

微生物无菌检查法的对照用菌液制备：

1、无菌检查法的对照用菌液—金黄色s葡萄球菌（Staphylococcus aureus）菌液取金黄色s葡萄球菌[CMCC(B)26003]的营养琼脂斜面新鲜培养物1白金耳，接种至营养肉汤培养基内，在30～35℃培养16～18小时后，用0.9%无菌氯化钠溶液稀释至每1ml中含10～100个菌。

2、无菌检查法的对照用菌液—生孢梭菌（Clostridium sporogenes）菌液取生孢梭菌[CMCC(B)64941]的需气菌、厌气菌培养基新鲜培养物1白金耳，接种至相同培养基内，在30～35℃培养18～24小时，用0.9%无菌氯化钠溶液稀释至每1ml中含10～100个菌。

3、无菌检查法的对照用菌液—白色念珠菌（Candida albicans）菌液取白色念珠菌[CMCC(F)98001]的真菌琼脂培养基斜面新鲜培养物1白金耳，接种至真菌培养基内，在20～25℃培养24小时后，用0.9%无菌氯化钠溶液稀释至每1ml中含10～100个菌。