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全能核酸酶-纯化细胞治疗产品、抗体药物及疫苗的利器 核酸酶介绍

提供者:上海玮驰仪器有限公司   发布时间:2025/1/11 8:26:21  阅读次数:157次  进入该公司店铺

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核酸酶是在核酸分解的第一步中,作用于水解核苷酸之间的磷酸二酯键的一种蛋白质。在高等动植物中都有作用于磷酸二酯键的。 不同来源的核酸酶,其专一性、作用方式都有所不同。有些核酸酶只能作用于RNA,称为核糖核酸酶(RNase),有些核酸酶只能作用于DNA,称为脱氧核糖核酸酶(DNase),有些核酸酶专一性较低,既能作用于RNA也能作用于DNA,因此统称为核酸酶(nuclease)。根据核酸酶作用的位置不同,又可将核酸酶分为核酸外切酶(exonuclease)和核酸内切酶(endonuclease)。

核酸酶历史

20世纪70年代,在细菌中陆续发现了一类核酸内切酶,能专一性地识别并水解双链DNA上的特异核苷酸顺序,称为限制性核酸内切酶(restrictionendonuclease,简称限制酶)。当外源DNA侵入细菌后,限制性内切酶可将其水解切成片段,从而限制了外源DNA在细菌细胞内的表达,而细菌本身的DNA由于在该特异核苷酸顺序处被甲基化酶修饰,不被水解,从而得到保护。

核酸酶分类介绍

核酸外切酶

有些核酸酶能从DNA或RNA链的一端逐个水解下单核苷酸,所以称为核酸外切酶。只作用于DNA的核酸外切酶称为脱氧核糖核酸外切酶,只作用于RNA的核酸外切酶称为核糖核酸外切酶;也有一些核酸外切酶可以作用于DNA或RNA。核酸外切酶从3′端开始逐个水解核苷酸,称为3′→5′外切酶,例如,蛇毒磷酸二酯酶即是一种3′→5′外切酶,水解产物为5′核苷酸;核酸外切酶从5′端开始逐个水解核苷酸,称为5′→3′外切酶,例如:牛脾磷酸二酯酶即是一种5′→3′外切酶,水解产物为3′核苷酸。
核酸内切酶

核酸内切酶催化水解多核苷酸内部的磷酸二酯键。有些核酸内切酶仅水解5′磷酸二酯键,把磷酸基团留在3′位置上,称为5′-内切酶;而有些仅水解3′-磷酸二酯键,把磷酸基团留在5′位置上,称为3′-内切酶。还有一些核酸内切酶对磷酸酯键一侧的碱基有专一要求,例如胰脏核糖核酸酶(RNaseA)即是一种高度专一性核酸内切酶,它作用于由嘧啶核苷酸C‘3处的羟基与下一个核苷酸C5’处的磷酸形成的3‘,5’-磷酸二脂键,产物为以3′嘧啶核苷酸结尾的低聚核苷酸和以5’核苷酸开头的低聚核苷酸。
非特异性核酸酶

20世纪五六十年代,、枯草芽孢杆菌等分泌的胞外核酸酶也被陆续分离出来。底物测试发现这些酶对DNA和RNA表现出非专一性,因此被新归类为非特异性核酸酶。

逐典Pannarase全能核酸酶是一种来源于Serratia marcescens的非特异性核酸内切酶,该酶可以将任何形式的 DNA 和 RNA (线性、环形、超螺旋)降解成3-5bp的寡核苷酸,并可在一系列宽泛的操作条件下保持高效性。逐典全能核酸酶从E.coli中表达纯化并在GMP条件下生产,可高效去除各种样品中的核酸杂质,助力解决广大疫苗生产、基因和细胞治疗厂商解决产品的核酸残留问题;此外某些病毒生产中可能会涉及到高盐的环境,逐典Pannarase耐高盐全能核酸酶将成为您“疑难杂症”的选择!

全能核酸酶优势:

1.无动物源性、无氨苄青霉素

2.杰出单位比酶活、更高效的核酸降解能力

3.先进的生产工艺,非传统His标签纯化、排除引入金属离子风险

4.严格的质控标准,内毒水平低,确保单位酶活的准确性以及批次间稳定性

全能核酸酶应用条件:

全能核酸酶的酶活会受到多种因素的影响(例如温度、pH、离子强度等),故用量范围也会从0.1 U/mL-250 U/mL不等。因此,不同的操作环境下酶的最佳浓度不同,需要通过实验设置梯度进行最佳条件的摸索。

应用实例:

1.样品:狂犬病毒浓缩液

处理条件:核酸酶浓度50~90U/ml ,

37 ℃处理 2 h,转入18 ~ 26 ℃处理 6h




2.样品:狂犬病病毒浓缩液

处理条件:25、50和100 U/ml,37℃




3.样品:流感病毒浓缩液

处理条件:10 U/mL,37℃




参考文献

[1] 崔燕平. 非限制性核酸内切酶对狂犬病疫苗中Vero细胞DNA的去除作用[J]. 中国生物制品学杂志, v.27(04):444-447.

[2] 刘杰,刘辉,杨会强,康庄,孙艳,毛川成,何敏,李玉华.多种方法结合去除冻干人用狂犬病疫苗中Vero细胞残留DNA[J].中国生物制品学杂志,2013,26(12):1827-1830.

[3] 阮朝列,施锦丽,李卫东等.Benzonase核酸酶在Vero细胞流感病毒灭活疫苗中的应用研究[J].病毒学报,2023,39(04):980-990.


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