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AZD 6482

MCE 国际站：AZD 6482

CAS：1173900-33-8

品牌：MedChemExpress (MCE)

存储条件：Powder: -20°C, 3 years; 4°C, 2 years.In solvent: -80°C, 6 months; -20°C, 1 month.

生物活性：AZD 6482 (KIN-193) 是一种有效的选择性 p110β 抑制剂，IC₅₀ 为 0.69 nM。 IC50 和目标：IC50：0.69 nM (p110β)^[1]体外： 体外激酶测定表明 AZD 6482 (KIN-193 ) 可高效抑制 p110β 的激酶活性（IC₅₀ 为 0.69 nM），选择性分别是 p110α、p110δ 和 p110γ 亚型的 200、20 和 70 倍。 AZD 6482 的选择性也比 PI3K-C2β 和 DNA-PK 高约 80 倍，比其他磷脂酰肌醇 3 激酶相关激酶 (PIKK) 高 1,000 倍以上。使用 KinomeScan 方法对 AZD 6482 与一组 433 种激酶进行抑制剂-激酶相互作用分析表明，AZD 6482 在与 PI3K 的相互作用中具有高度选择性。为确定 AZD 6482 是否选择性靶向 PTEN 缺陷肿瘤，使用高通量肿瘤细胞系分析测试了 AZD 6482 对大量 422 癌细胞系的细胞增殖的影响。 35% 的 PTEN 突变细胞系（57 个中的 20 个）和 16% 的野生型 PTEN 细胞系（365 个中的 58 个）对 AZD 6482 敏感，阈值为 EC₅₀< 5 μM^[1]。 体内：为了确定 AZD 6482 (KIN-193) 在体内肿瘤中的药效学，大鼠成纤维细胞 (Rat1) 被设计为表达 p53DD，一种显性失活p53 突变体和组成型激活的 myr-p110β (Rat1-CA-p110β) 使这些细胞能够在小鼠体内形成异种移植肿瘤。为了进行比较，还生成了表达 p53DD 和 myr-p110α (Rat1-CA-p110α) 的等基因 Rat1 细胞系。将 Rat1-CA-p110α 和 Rat1-CA-p110β 细胞皮下引入无胸腺小鼠的对侧胁腹，这样由活化的 p110α 或 p110β 驱动的肿瘤将暴露在相同的条件下，并且可以消除对动物间变异性的担忧.当肿瘤达到约 500 mm³ 的体积时，荷瘤小鼠接受单次 IP 注射 AZD 6482 (10 mg/kg)。 AZD 6482 的血浆浓度在注射后 1 小时达到最高，并在 4 小时内下降至检测不到的水平。 AZD 6482 在 CA-p110α 和 CA-p110β 驱动的肿瘤中的浓度与血浆浓度平行。对注射 AZD 6482 后不同时间点收集的肿瘤裂解物的分析表明，在注射 AZD 6482 后 1 小时，在 Rat1-CA-p110β 肿瘤中 AKT 的磷酸化显着降低，但在 Rat1-CAp110α 肿瘤中保持不变^[1]。

体外：体外激酶测定表明，AZD 6482 (KIN-193) 可高效抑制 p110β 的激酶活性（IC₅₀ 为 0.69 nM），选择性是 p110α 的 200、20 和 70 倍、p110δ 和 p110γ 亚型。 AZD 6482 的选择性也比 PI3K-C2β 和 DNA-PK 高约 80 倍，比其他磷脂酰肌醇 3 激酶相关激酶 (PIKK) 高 1,000 倍以上。使用 KinomeScan 方法对 AZD 6482 与一组 433 种激酶进行抑制剂-激酶相互作用分析表明，AZD 6482 在与 PI3K 的相互作用中具有高度选择性。为确定 AZD 6482 是否选择性靶向 PTEN 缺陷肿瘤，使用高通量肿瘤细胞系分析测试了 AZD 6482 对大量 422 癌细胞系的细胞增殖的影响。 35% 的 PTEN 突变细胞系（57 个中的 20 个）和 16% 的野生型 PTEN 细胞系（365 个中的 58 个）对 AZD 6482 敏感，阈值为 EC₅₀< 5 M^[1]。

体内：为了确定 AZD 6482 (KIN-193) 在体内肿瘤中的药效学，大鼠成纤维细胞 (Rat1) 被设计为表达 p53DD（p53 的显性失活突变体）和组成型激活的 myr-p110β (Rat1-CA-p110β ) 使这些细胞能够在小鼠体内形成异种移植肿瘤。为了进行比较，还生成了表达 p53DD 和 myr-p110α (Rat1-CA-p110α) 的等基因 Rat1 细胞系。将 Rat1-CA-p110α 和 Rat1-CA-p110β 细胞皮下引入无胸腺小鼠的对侧胁腹，这样由活化的 p110α 或 p110β 驱动的肿瘤将暴露在相同的条件下，并且可以消除对动物间变异性的担忧.当肿瘤达到约 500 mm³ 的体积时，荷瘤小鼠接受单次 IP 注射 AZD 6482 (10 mg/kg)。 AZD 6482 的血浆浓度在注射后 1 小时达到最高，并在 4 小时内下降至检测不到的水平。 AZD 6482 在 CA-p110α 和 CA-p110β 驱动的肿瘤中的浓度与血浆浓度平行。对注射 AZD 6482 后不同时间点收集的肿瘤裂解物的分析表明，在注射 AZD 6482 后 1 小时，在 Rat1-CA-p110β 肿瘤中 AKT 的磷酸化显着降低，但在 Rat1-CAp110α 肿瘤中保持不变^[1]。

激酶试验：AZD 6482 (KIN-193) 在 10 M 浓度下针对多种 433 种激酶进行分析。主屏幕点击的分数以 DMSO 对照的百分比（％对照）报告。对于未显示分数的激酶，未检测到可测量的结合。分数越低，Kd 可能越低，因此分数为零代表强命中。分数与命中概率相关，但严格来说并不是亲和力测量。在筛选浓度为 10 M 时，分数低于 10% 意味着假阳性概率低于 20%，并且 Kd 很可能低于 1 M。 1-10% 之间的分数意味着假阳性概率低于 10%，尽管很难从单点初级筛选中分配定量亲和力。分数低于 1% 意味着假阳性概率低于 5%，并且 Kd 很可能低于 1 M[1]。

细胞试验：测定细胞活力。简而言之，将细胞接种在含有 5% FBS 的培养基中，其密度确保细胞在整个药物处理过程中生长（对于大多数细胞系约为 15%）。播种后24小时开始药物处理并持续72小时。使用 Syto60（一种红色荧光 DNA 染料）固定细胞并对其进行染色。相对细胞数通过扣除背景后药物处理孔与未处理孔（无细胞孔）的相对荧光强度之比来计算。以 5.12 M 至 0.02 M 范围的 2 倍稀释步骤使用九个剂量的 AZD 6482 (KIN-193)。 IC50 相当于与对照（未处理）孔相比 50% 的细胞数，是使用 PipelinePilot[1] 中实施的固定顶部和底部 S 形拟合算法确定的。

动物体内实验:小鼠[1] 约 6-8 周龄的雌性裸鼠在一侧（位点 1）和 Rat1 皮下注射 Rat1-Myr-HA-p110α(Rat1-CAp110α) 细胞（40% 基质胶中的 1×106 个细胞） -Myr-HA-p110β (Rat1-CAp110β) 细胞（10% 基质胶中的 0.5×106 个细胞）位于对侧侧翼（位点 2）。当肿瘤生长至约 500 mm3 时，通过腹腔注射一次以 0.1 mL/10g 体重和 10 mg/kg 配制在 7.5% NMP、40% PEG400、52.5% dH2O 中的 AZD 6482 给小鼠给药。在施用化合物后0、1、4、8和24小时收集肿瘤，并通过直接心脏穿刺获得血样。分离血清并储存在-80°C。 DMPK 组通过 LC-MS/MS 分析评估血清和肿瘤样品中的药物浓度。

研究领域：PI3K/Akt/mTOR | Autophagy

作用靶点：PI3K | Autophagy

参考文献：

[1]. Ni J, et al. Functional characterization of an isoform-selective inhibitor of PI3K-p110β as a potential anticancer agent. Cancer Discov. 2012 May;2(5):425-33.