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Ispinesib | 伊斯平斯

MCE 国际站：Ispinesib

中文名：伊斯平斯

CAS：336113-53-2

品牌：MedChemExpress (MCE)

存储条件：4°C, protect from light

生物活性：Ispinesib 是一种纺锤体驱动蛋白 (KSP) 的特异性抑制剂，K_{i app} 为 1.7 nM。 IC50 和目标：Ki app：1.7 nM (KSP)^[1]体外： Ispinesib 是一种有效的、高度特异性的 KSP 抑制剂， K_{i app} 为 1.7 nM^[1]。 Ispinesib (150 nM) 抑制 BT-474 和 MDA-MB-468 细胞系，GI₅₀ 分别为 45 和 19 nM^[2]。 Ispinesib (SB715992, 15 和 30 nM) 分别抑制 PC-3 前列腺癌细胞增殖 48.65% 和 52.16%，并分别诱导前列腺癌细胞凋亡 1094.88% 和 1516.70%。 Ispinesib 上调负责细胞凋亡和细胞周期停滞的基因，下调负责细胞增殖和存活的基因。染料木黄酮可以增强 Ispinesib 的抗增殖和促凋亡活性^[3]。 体内： Ispinesib（SCID，8 mg/kg；裸，10 mg/kg，q4d × 3）减少携带 ER 阳性肿瘤异种移植物的小鼠的肿瘤体积（ MCF7)、HER2 阳性（KPL4、HCC1954 和 BT-474）和三阴性 (MDA-MB-468) 乳腺癌细胞，每 4 天腹腔注射一剂，重复三次^[2]。

体外：Ispinesib 是一种有效、高度特异性的 KSP 抑制剂，K_{i app} 为 1.7 nM^[1]。 Ispinesib (150 nM) 抑制 BT-474 和 MDA-MB-468 细胞系，GI₅₀ 分别为 45 和 19 nM^[2]。 Ispinesib (SB715992, 15 和 30 nM) 分别抑制 PC-3 前列腺癌细胞增殖 48.65% 和 52.16%，并分别诱导前列腺癌细胞凋亡 1094.88% 和 1516.70%。 Ispinesib 上调负责细胞凋亡和细胞周期停滞的基因，下调负责细胞增殖和存活的基因。染料木黄酮可以增强 Ispinesib 的抗增殖和促凋亡活性^[3]。

体内：Ispinesib（SCID，8 mg/kg；nude，10 mg/kg，q4d × 3）减少携带 ER 阳性（MCF7）、HER2 阳性（KPL4、HCC1954 和 BT-474）肿瘤异种移植物的小鼠的肿瘤体积，和三阴性 (MDA-MB-468) 乳腺癌细胞，每 4 天腹腔注射一剂，重复三次^[2]。

激酶试验：使用丙酮酸激酶-乳酸脱氢酶检测系统进行驱动蛋白特异性分析，该系统将 ADP 的产生与 NADH 的氧化结合起来。在 340 nm 处监测吸光度变化。使用纳摩尔浓度的 KSP 进行稳态研究是通过灵敏的基于荧光的测定进行的，该测定利用丙酮酸激酶、丙酮酸氧化酶和辣根过氧化物酶耦合检测系统，该系统将 ADP 的生成与 Amplex Red 氧化成荧光试卤灵耦合。通过荧光（λ激发 = 520 nm 和 λ发射 = 580 nm）监测试卤灵的生成。稳态生化实验在补充有 10 M 紫杉醇的 PEM25 缓冲液 [25 mM Pipes-K+ (pH 6.8)、2 mM MgCl2、1 mM EGTA] 中进行，用于涉及微管的实验。稳态抑制的 IC50 在 PEM25 缓冲液中的 500 M ATP、5 M MT 和 1 nM KSP 下测定。 Ispinesib 的 Ki app（表观抑制剂解离常数）估计值是从浓度-响应曲线中提取的，并对酶浓度进行了明确校正[1]。

细胞试验：PC-3 前列腺癌细胞以 4 × 103 个细胞/孔的密度接种在 96 孔板中。 PC-3 细胞孵育 24 小时，使其附着在组织培养板每个孔的表面。然后，用不同浓度的试剂处理细胞并孵育1至3天。首先，分别用 15 和 30 nM Ispinesib 处理 PC-3 细胞。其次，PC-3 细胞接受 7.5 或 10 nM Ispinesib 加 30 μM 金雀异黄素的组合治疗。最后，PC-3 细胞用 30 μM 金雀异黄素预处理 24 小时，然后用 15 nM Ispinesib 处理。对照细胞用 0.3 mM Na2CO3 处理（载体对照）。处理后，PC3细胞在37°C下用MTT (0.5 mg/mL)孵育2小时，并在室温下用异丙醇孵育1小时。然后使用 ULTRA 多功能酶标仪在 595 nm 处测定每个样品的分光光度吸光度[3]。

动物体内实验:肿瘤体积约为 250 mm3 的小鼠接受单剂量 Ispinesib (10 mg/kg)。解剖肿瘤，固定在 10% 缓冲福尔马林中，包埋在石蜡中，并制备 5 μm 组织切片。通过在 50 mM 柠檬酸盐缓冲液（pH 5.5）中煮沸来进行抗原修复，然后将切片在 3% 过氧化氢中孵育，在 PBS-0.1% Tween 中洗涤，并在 10% 山羊血清中封闭。使用 Alexa Fluor 488 二抗检测磷酸组蛋白 H3 (PH3) 抗体。使用放大倍数为 10 倍的显微镜拍摄图像，并使用 MetaMorph 软件捕获图像，通过计算 PH3 阳性细胞与总细胞的面积比来量化 PH3 表达。 Ki67/裂解的 caspase-3 染色完成。非荧光图像是在 Olympus BX41 显微镜上以 20 倍放大倍数拍摄的[2]。

研究领域：Cell Cycle/DNA Damage | Cytoskeleton | Apoptosis

作用靶点：Kinesin | Apoptosis

参考文献：

[1]. Lad L, et al. Mechanism of inhibition of human KSP by ispinesib. Biochemistry. 2008 Mar 18;47(11):3576-85.[2]. Purcell JW, et al. Activity of the kinesin spindle protein inhibitor ispinesib (SB-715992) in models of breast cancer. Clin Cancer Res. 2010 Jan 15;16(2):566-76.[3]. Davis DA, et al. Increased therapeutic potential of an experimental anti-mitotic inhibitor SB715992 by genistein in PC-3 human prostate cancer cell line. BMC Cancer. 2006 Jan 24;6:22.