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Andrographolide | 穿心莲内酯

MCE 国际站：Andrographolide

中文名：穿心莲内酯

CAS：5508-58-7

品牌：MedChemExpress (MCE)

存储条件：Powder: -20°C, 3 years; 4°C, 2 years.In solvent: -80°C, 6 months; -20°C, 1 month.

生物活性：Andrographolide 是一种 NF-κB 抑制剂，通过共价修饰内皮细胞 p50 上的半胱氨酸残基来抑制 NF-κB 活化，而不影响 IκBα 降解或 p50/p65 核转位.穿心莲内酯具有抗病毒作用。 IC50 和目标：NF-κB1/p50^[1]体外： 穿心莲内酯 (AP) 浓度依赖性抑制核因子 kappa 受体激活剂B 配体 (RANKL) 介导的体外破骨细胞分化和骨吸收，并减少破骨细胞特异性标志物的表达。 Andrographolide 通过共价修饰 p50 的还原 Cys⁶² 来抑制 TNFα 诱导的 NF-κB 活化，从而减轻炎症，而不影响 IκBα 降解或 p50/p65 核转位。穿心莲内酯还可抑制 ERK/MAPK 信号通路，而不影响 p38 或 JNK 信号通路。 Andrographolide 以浓度依赖性方式抑制 RAW 264.7 细胞的破骨细胞分化。在 BMM 和 RAW 264.7 细胞中，穿心莲内酯以浓度依赖性方式抑制破骨细胞形成，而没有任何明显的细胞毒性作用。穿心莲内酯治疗大大减少了骨吸收的面积。在用 2.5?μM Andrographolide 处理后，在对照组中观察到的骨吸收只有大约 30%。用 10?μM 穿心莲内酯^[1] 处理后，破骨细胞的骨吸收几乎完全被抑制。体内穿心莲内酯（5 或 30?mg/kg）治疗可降低 LPS 引起的骨质流失程度。此外，与 LPS 治疗相比，穿心莲内酯略微增加 BMD 和皮质厚度。组织学检查证实了 Andrographolide 对 LPS 诱导的骨丢失的保护作用。 LPS 注射导致炎症性骨侵蚀和 TRAP 阳性破骨细胞数量增加^[1]。

体外：穿心莲内酯 (AP) 浓度依赖性地抑制核因子 kappa B 配体 (RANKL) 介导的体外破骨细胞分化和骨吸收的受体激活剂，并降低破骨细胞特异性标志物的表达。 Andrographolide 通过共价修饰 p50 的还原 Cys⁶² 来抑制 TNFα 诱导的 NF-κB 活化，从而减轻炎症，而不影响 IκBα 降解或 p50/p65 核转位。穿心莲内酯还可抑制 ERK/MAPK 信号通路，而不影响 p38 或 JNK 信号通路。 Andrographolide 以浓度依赖性方式抑制 RAW 264.7 细胞的破骨细胞分化。在 BMM 和 RAW 264.7 细胞中，穿心莲内酯以浓度依赖性方式抑制破骨细胞形成，而没有任何明显的细胞毒性作用。穿心莲内酯治疗大大减少了骨吸收的面积。在用 2.5 μM 穿心莲内酯处理后，在对照组中观察到的骨吸收只有大约 30%。用 10 μM Andrographolide^[1] 处理后，破骨细胞的骨吸收几乎完全被抑制。

体内：用 Andrographolide（5 或 30 mg/kg）治疗可减少 LPS 引起的骨质流失程度。此外，与 LPS 治疗相比，穿心莲内酯略微增加 BMD 和皮质厚度。组织学检查证实了 Andrographolide 对 LPS 诱导的骨丢失的保护作用。 LPS 注射导致炎症性骨侵蚀和 TRAP 阳性破骨细胞数量增加^[1]。

激酶试验：进行体外破骨细胞生成试验以检查穿心莲内酯对破骨细胞分化的影响。制备骨髓巨噬细胞（BMM）。简而言之，将从 6 周龄 C57/BL6 小鼠股骨和胫骨中提取的细胞在 T-75 cm2 烧瓶中的完全细胞培养基和 30 ng/mL M-CSF 中孵育以进行增殖。更换培养基时，洗涤细胞以去除残留的基质细胞。达到90%汇合后，用PBS洗涤细胞3次，并胰蛋白酶消化30分钟以收获BMM。粘附在培养皿底部的细胞被归类为 BMM；将这些 BMM 以每孔 8×103 个细胞的密度一式三份铺在 96 孔板中，并在含有 5% CO2 的加湿培养箱中于 37°C 孵育 24 小时。然后用不同浓度的穿心莲内酯（0、2.5、5 或 10 μM）加 M-CSF (30 ng/mL) 和 RANKL (50 ng/mL) 处理细胞。 5 天后，固定细胞并对其抗酒石酸酸性磷酸酶 (TRAP) 活性进行染色。具有五个以上细胞核的TRAP阳性多核细胞被计为破骨细胞[1]。

细胞试验：使用 CCK-8 测定穿心莲内酯对细胞增殖的影响。 BMM 以每孔 3×103 个细胞的密度接种在 96 孔板中，一式三份。 24 小时后，用浓度逐渐增加的穿心莲内酯（0、2.5、5、10 或 20 μM）处理细胞 2 天。接下来，将 10 μL CCK-8 添加到每个孔中，然后将板在 37°C 下再孵育 2 小时。然后使用 ELX800 吸光度酶标仪在 450 nm 波长（650 nm 参考）下测量光密度 (OD)。计算细胞活力[1]。

动物体内实验:将小鼠[1] C57BL/6 小鼠（8 周龄）分为四组，每组七只小鼠。在注射LPS（5μg/g体重）前1天，给小鼠腹腔注射穿心莲内酯（5或30mg/kg体重）或PBS作为对照。每隔一天腹腔注射穿心莲内酯或PBS，持续8天。在第一天和第四天腹膜内注射 LPS。首次注射 LPS 后 8 天处死所有小鼠，并用分辨率为 9 μm 的高分辨率微型 CT 扫描所有动物的左股骨。

研究领域：NF-κB | Anti-infection | Autophagy

作用靶点：NF-κB | SARS-CoV | Influenza Virus | Autophagy | Parasite

参考文献：

[1]. Zhai ZJ, et al. Andrographolide suppresses RANKL-induced osteoclastogenesis in vitro ａnd prevents inflammatory bone loss in vivo. Br J Pharmacol. 2014 Feb;171(3):663-75.[2]. Gupta S, et al. Broad-spectrum antiviral properties of andrographolide. Arch Virol. 2017 Mar;162(3):611-623.