植物组织DNA损伤彗星（Comet）全荧光检测试剂是一种旨在采用分离的细胞核碱性凝胶电泳，在电场环境下，损伤变性的DNA片段迁移形成特定的形态，即DNA移动尾巴，来进行体外评价和半定量分析DNA损伤程度的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于新鲜植物组织包括叶片（leaf）、谷粒（grain）、种子（seed）和根尖（root tip）等DNA损伤研究，包括DNA链断裂、氧化性碱基损伤、DNA剪切损伤、DNA交联、DNA修复等，应用于环境和药物毒理学原位监测、原位突变（mutagenesis in situ）分析、氧化应急反应等研究。产品严格无菌，即到即用，性能稳定，操作简便，重复一致。

保存方式

保存在4℃冰箱里；胶体液（Reagent A）和基质液（Reagent B）室温下保存；染色液（Reagent G）避免光照；电泳液（Reagent E）具有腐蚀性，注意操作安全；有效证6月

用户自备

无离子水：用于稀释电泳缓冲液

磨砂载玻片和盖玻片：用于放置样品进行微凝胶电泳的器材

恒温培养箱：用于孵育反应

电泳槽：用于微凝胶电泳的装置

1.5毫升离心管：用于混匀基质液的容器

90 mm培养皿：用于样品处理、染色等的容器

荧光显微镜：用于观察细胞核彗星现象

实验步骤

一、 琼脂载玻片准备

1． 准备1张全磨砂载玻片，磨砂面朝上

2． 将胶体液（Reagent A）置于微波炉里加热溶化（注意：避免溢出；参见注意事项4）

3． 放进45℃恒温水槽孵育5分钟

4． 移出xx微升胶体液（Reagent A）到载玻片中间

5． 盖上洁净的盖玻片

6． 轻压盖玻片5分钟，确保胶体液铺展

7． 放进4℃冰箱里备用

二、 样品准备

实验开始，将基质液（Reagent C）置于微波炉里加热溶化（注意：参见注意事项4），然后放进45℃恒温水槽备用。然后进行下列操作。

1． 准备1片新鲜的待测叶片

2． 铺平放进60mm细胞培养皿，置于冰槽里（注意：避免直线光照）

3． 加入xx微升预冷的缓冲液（Reagent B）

4． 使用新的洁净的手术刀，轻柔地切割叶片成细丝状或根尖成细块状（注意：避免切成浆液状或粉碎状）

5． 倾斜和平放培养板三次，确保叶片和缓冲液充分混合

6． 移出50微升细胞核分离液（无渣叶片液）到1.5毫升离心管

7． 加入xx微升在45℃恒温水槽里的基质液（Reagent C）

8． 用枪头上下抽吸混匀

9． 用大拇指推动移走上述制备的载玻片上的盖玻片

10． 即刻移取75微升胞核基质混合液到载玻片上

11． 用新的盖玻片盖上

12． 轻压盖玻片5分钟，确保胞核基质混合液铺展

13． 放进4℃冰箱里冷却10分钟，直至胶体凝结，避免光照

14． 用大拇指推动移走上述制备的载玻片上的盖玻片

15． 即刻移取xx微升在45℃恒温水槽里的基质液（Reagent C）到载玻片上胞核基质混合液上面

16． 用新的盖玻片盖上

17． 轻压盖玻片5分钟，确保基质液铺展

18． 放进4℃冰箱里冷却10分钟，直至胶体凝结，避免光照

19． 用大拇指推动移走上述制备的载玻片上的盖玻片

20． 将载玻片放进9cm培养皿

21． 加入xx毫升预冷的裂解液（Reagent D）

22． 放进4℃冰箱里孵育60分钟

23． 抽去裂解液

三、 凝胶电泳

1． 移出xx毫升电泳液（Reagent E）到250毫升三角烧瓶里

2． 加入225毫升用户自备的无离子水，充分混匀后，标记为电泳工作液

3． 用大拇指推动移走上述制备的载玻片上的盖玻片

4． 将载玻片置于（具有温度控制的）水平电泳槽里

5． 加入适量的电泳工作液到电泳槽里，恰好在载玻片之上

6． 室温下孵育20分钟

7． 插上电源，设定电压为25伏

8． 在4℃环境下，电泳20分钟

9． 断开电源，取出载玻片

10． 放进9cm培养皿

11． 加入xx毫升中和液（Reagent F）

12． 倒去中和液

13． 重复实验步骤11至12二次

14． 空气中晾干注意事项

1． 本产品为20次操作

2． 操作时须戴手套

3． 整个操作，建议在暗光下进行

4． 胶体液（Reagent A）和基质液（Reagent B）微波炉加热融化时，松开瓶盖，低功率，且密切观察，防止过度加热，导致溢出或干枯

5． 建议使用新鲜植物组织

6． 可以使用8毫摩尔/升甲磺酸乙脂（ethyl methanesulfonate；EMS）预处理样品作为阳性对照，建议使用植物种子甲磺酸乙脂突变诱导试剂盒－GMS16006

7． 操作时小心轻柔，避免胶体脱位

8． 电泳温度过高，会造成胶体脱位

9． 电泳液（Reagent E）具有腐蚀性，注意操作安全

10． 电泳时，电压25伏为佳，建议控制电泳液量或更换电泳液达到要求

11． 植物组织DNA损伤彗星图像如下

12． 本公司提供系列DNA损伤检测分析试剂产品

质量标准

1． 本产品经鉴定性能稳定