产品简介：

钙在人体内大量存在，构成骨骼作为支持人体的支架，在分泌、运送、肌肉收缩、神经传导等也起重要作用，钙在机体内以两种形式存在，一种是离子钙，存在血液循环内，即所谓血钙；另一种是结合钙，和蛋白、碳酸或磷酸结合而沉着在组织内，除骨骼和牙齿外正常时钙渗透在所有组织和细胞中，一般不以固体状态出现在组织内，但在某些情况下钙析出成固体并沉着于组织内，则为病理性钙盐沉着，沉着的钙盐主要是磷酸钙，其次为碳酸钙。钙盐通常是单折射的，但草酸钙是双折射的，当使用HE 染色时钙一般呈紫蓝色，许多染料可以于钙形成螯合物，包括茜素红S、红紫素、核固红等，茜素红S 属一种蒽醌类衍生物，是茜素磺酸钠盐，它能与碳酸钙或磷酸钙中的钙盐螯合形成橙红色复合物。
钙盐染色常用方法有硝酸银法和茜素红S法，钙盐染色液(Von Kossa 银法)又称冯库萨染色液，属金属置换法，其原理在于 Von Kossa 银溶液作用于含有不溶性钙盐的切片时， 钙被银置换，银盐在光的作用下被还原为黑色金属银，适用于大量样本的钙盐组织染色。该试剂仅用于科研领域，不适用于临床诊断或其他用途。

自备材料：

1、10%中性福尔马林固定液、系列乙醇、蒸馏水、环保脱蜡透明液、中性树胶

2、HE染色液或Van Gieson 染色液、碳酸锂水溶液

操作步骤(仅供参考)：

一、常规染色

1、组织固定于10%中性福尔马林固定液，常规脱水包埋。

2、切片厚度3~5μm，常规二甲苯或脱蜡透明液脱蜡至水，蒸馏水洗。

3、切片入Von Kossa 银溶液，强光照射15~60min(见注意事项2)，蒸馏水洗1min。

4、入海波溶液处理2min，HE染色液或Van Gieson 复染细胞核1min。

5、常规脱水，二甲苯或 脱蜡透明液透明，中性树胶封固。

二、不溶性钙染色

1、组织固定于10%中性福尔马林固定液，常规脱水，注意在95%乙醇中脱水应充分。

2、塑料包埋，室温过夜，37℃烤箱中聚合2~4 天，-20℃冰箱冷却15~20min。

3、切片厚度3~5μm，未脱钙骨切片脱塑至水，蒸馏水洗。

4、切片入Von Kossa 银溶液，强光照射 10~60min(见注意事项 2)，蒸馏水洗。

5、入海波溶液处理2min，HE染色液、中性红或 Van Gieson 复染细胞核1min。

6、常规脱水，二甲苯或脱蜡透明液透明，中性树胶封固。

阴性对照：如有必要，可做阴性对照。取另外一张连续切片脱蜡(脱塑)至水，置于 Von Kossa 对照液处理10~20min，蒸馏水冲洗，与试验片一同入Von Kossa 银溶液，余下步骤同上， 结果应为阴性。

注意事项：

1、 钙盐组织固定以中性福尔马林为佳，不宜采用 Bouin 液等酸性固定液和甲醛钙固定液； 如用常规的10%福尔马林固定，固定4～6h后即可进行脱水包埋，以防止固定液酸化导致钙盐溶解。

2、 作用时间取决于阳光照射时光的强度和时间；如暴露于强光下15min 已经足够；如暴露于紫外灯下10min 即可；如暴露于一般光线下，宜适当延长曝光时间。

3、 如果钙盐染色过深，可用蒸馏水适当稀释Von Kossa 银溶液或减少光照时间或光照强度；如果钙盐染色较浅，应增加Von Kossa银溶液用量并增加光照时间和光照强度。

4、 该染色法可以区分尿酸盐和钙盐，其原理在于钙盐不溶解于碳酸锂溶液，尿酸盐则易溶。因此，切片经碳酸锂处理后入Von Kossa银溶液并置于强光下照射，呈阴性者为尿酸盐。

5、 试剂开封后请尽快使用，以防影响后续实验效果。

有效期：12个月有效；低温运输，按要求保存。