ECL化学发光检测试剂是基于 Luminol的新一代增强型化学发光底物试剂，可与二抗上偶联的辣根过氧化物酶(Horseradish Peroxidase，HRP)催化发生化学反应而发出荧光， 结果可以通过 X光片压片和其他显影技术展现或使用 Luminometer检测。

ECL Plus 化学发光液采用了独特的发光底物系统，可通过 HRP 实现低皮克(以 HRP 浓度为准)的免疫印迹检测，其灵敏度，发光时间和背景均明显。
特点有：

①可使用更高的抗体稀释倍数(1:2000～1:10000)，其节省抗体；②可替代其它公司的 ECL发光液，操作步骤无需进行特别优化，简单易用；③可检测低皮克的蛋白，灵敏度更高；④光信号持续时间长达 5小时，信号持续时间更长；⑤有更多的成像方法，可适用于X射线胶片、CCD 或激光成像仪等；⑥相比其他品牌的类似产品，不仅具有高品质和高性能， 同时价格也更低。该试剂可用于 HRP 标记抗体的 Western Blot 和 HRP标记探针的核酸杂交。本产品仅于业人员用于生命科学研究，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅。

操作步骤（仅供参考）：

1、 配制 ECL Plus 工作液：临检测根据需要量，分别取等体积的 Reagent A 和 Reagent B，放入干净容器中混合。暴漏于日光或任何其他强光可能损害 ECL Plus 工作液，为获得比较佳结果，将此工作液保存在避光瓶中，并避免暴漏于任何强光。短时间暴漏于 实验室常规照明不会损害该工作液。建议配制后立即使用工作液，室温放置数小时后仍 可使用但灵敏度略有降低。

2、Western Blot 二抗孵育数次洗涤后，用镊子将膜轻轻取出，用吸水纸略吸去过多的液体(勿接触膜的蛋白面)，然后置于一洁净保鲜膜或恰当容器上。根据膜的大小，按每0.12ml 工作液/cm2 膜的比例，滴加 ECL Plus 工作液到膜上，确保使工作液均匀覆盖在膜上，室温孵育 1~3min，准备立即压片曝光。孵育时间过长不会增加灵敏度，有时还会导致曝光条带异常。发光过程的本质是酶促反应，使用过少的发光工作液不利于反应进行，也会导致膜上条带曝光不均和明显降低灵敏度。为达节约目的可将膜剪小但勿 降低发光液用量

3、用镊子夹起膜，用滤纸略吸去过多的液体。打开 X 光胶片暗盒，在暗盒内表面铺一张面积大于膜的保鲜膜。将Western Blot 膜贴在保鲜膜上，将保鲜膜折起来充分包裹Western Blot 膜，去除气泡和皱褶，可剪去边缘部多余的保鲜膜。用滤纸吸去多余的发光工作液。用胶带将覆盖 Western Blot 膜的保鲜膜固定在暗盒内，蛋白带面向上。

4、在暗室内进行 X 光胶片曝光，立即显影定影，根据结果再调整压片时间或直接分别曝光0.5，1，3，5min，然后一起显影定影观察结果。亦可采用荧光成像仪检测：将膜放置 到荧光成像仪内，参考仪器说明书进行检测。

注意事项：
1、ECL Plus Reagent A 和 ECL Plus Reagent B 在吸取过程中必须要更换枪头，上述试剂相互污染后会导致两种试剂逐渐失效，影响后续的使用效果。
2、步骤 1~3可在日光灯下操作；但发光液曝露于强光下时间过久灵敏度可能略有降低， 移到暗房操作可避免。戴手套可以避免在膜上留下手印。
3、发光工作液孵育约3分钟后膜上的条带发光。强条带发光在暗房中肉眼可见，低丰度蛋白条带发光较弱甚至肉眼不可见但可使 X 光胶片曝光。不能简单以肉眼观察判断条带发光时间。肉眼不可见的荧光实际上可持续数小时并使 X 光胶片感光，因而弱带可曝光 1-10 小时。如果曝光后条带不佳，可用洗膜缓冲液洗膜，重新孵育二抗，然后重新用 ECL 发光和曝光。
4、由于超敏发光液其灵敏，强烈推荐大多数进口抗体起始浓度为一抗 1:1000～1:4000， 二抗 1:2000～1:5000。抗体浓度过高将造成高背景或没有条带，导致实验失败。
5、某些保鲜膜包裹印迹膜时可能会淬灭荧光，应选择高质量保鲜膜。
6、使用肉眼可见的预染色蛋白 Marker 和荧光-放射自显影曝光标签可确定胶片上条带的位置和大小。
7、当使用亲和素/生物素系统时，应避免使用含有脱脂奶粉的封闭液。
8、洗涤液、封闭液、抗体稀释液、ECL 工作液应足量使用，确保印迹膜处于湿润状态。
9、NaN3 能抑制 HRP 活性，回收第二抗体应避免使用 NaN3，如必需使用勿超过 0.01%。
10. 长时间曝光或蛋白过量，将加深背景并使条带强弱变化失去线性关系。曝光不足则条带 模糊。
11. 荧光持续时间很长，但开始反应后的 20min 内荧光更强一些，随后荧光会逐渐减弱， 因此请注意充分利用这荧光较强的 20min 进行曝光或成像仪检测。
12. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

有效期：室温运输，4℃密封避光保存，12 个月有效；长时间不用，-20℃可保存更长时间。