鸡II型胶原氨基端原肽(PIINP) ELISA 试剂盒
准备工作
1.孔板室温平衡1小时
2.做好布板图谱
3.样本解冻
4.准备各型号的移液枪、枪头、量筒
5.准备双蒸水
6.根据样本量配好样本稀释液
7.根据样本量及洗板次数配好洗液
8.若需要提设置好振板器、洗板器
9.准备足够量的擦手纸
10.根据说明书提示，溶解标准品
11.配制不同浓度的标准品
12.配制质控品
13.根据预实验结果稀释样本
14.准备好封板膜
实验步骤
1. 准备：准备好所有试剂、材料和器具。
2. 温育：将包被有特异性抗体的酶标板放入37℃温箱中温育30分钟。
3. 加样：分别向各孔中加入标准品、待测样本，轻轻混匀。
4. 温育：将酶标板放入37℃温箱中继续温育30分钟。
5. 洗涤：清洗酶标板，除去未结合的抗原抗体。
6. 加酶标二抗：向各孔中加入酶标二抗，轻轻混匀。
7. 温育：将酶标板放入37℃温箱中继续温育30分钟。
8. 洗涤：清洗酶标板，除去未结合的酶标二抗。
9. 加底物溶液：向各孔中加入底物溶液，轻轻混匀。
10. 显色：将酶标板放入37℃温箱中继续温育15分钟。
11. 终止：向各孔中加入终止液，混匀。
12. 测量：在450nm波长下测量各孔的光密度值（OD值）。
操作注意事项1. 试剂盒保存在 2-8℃，使用室温平衡 20 分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶溶解后再使用。
2. 实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。
3. 浓度为 0 的标准品可视为阴性对照或者空白；按照说明书操作时样本已经稀释 5 倍，终结果乘以5才是样本终浓度。
4. 严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。
5. 所有液体组分使用充分摇匀。
6. 若中英文说明书有误，请以中文说明书为准。
7. 20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按 1：20 稀释，即 1 份的 20×洗涤缓冲液加 19 份的蒸馏水。
8. 不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
样本处理
1.组织取出尽量进行心脏灌流2.组织表面不能有毛发等不相关组分
3.组织称重(mg)后立即放入EP管中
4.向EP管中加入9倍量的PBS (μL)
5.用匀浆机进行组织匀浆
6.离心
7.小心吸取上清
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