细胞在体外培养中所需的条件与体内细胞基本相同。

1、无污染环境

培养环境无毒和无菌是保证细胞生存的要条件。当细胞放置于体外培养时，与体内相比细胞丢失了对微生物 和有毒物的防御能力，旦被污染或自身代谢物质积累等，可导致细胞死亡。因此在进行培养中，保持细胞生存环境无污染、代谢物及时清除等，是维持细胞生存的基本条件。

2、恒定的温度

维持培养细胞旺盛生长，必须有恒定适宜的温度。人体细胞培养 的标准温度为36.5℃±0.5℃，偏离这温度范围，细胞的正常代谢会受到影响，甚至死亡。培养细胞对低温的耐受力较对高温强，温度上升不超过39℃时，细胞代谢与温度成正比;人体细胞在39-40℃1小时，即能受到定损伤，但仍有可能恢复;在40-41℃1小时，细胞会普遍受到损伤，仅小半数有可能恢复;41-42℃1小时，细胞受到严重损伤，大部分细胞死亡，个别细胞仍有恢复可能;当温度在43℃以上1小时，细胞全部死亡。

3、气体环境

气体是人体细胞培养生存必需条件之，所需气体主要有氧气和二氧化碳。氧气参与三羧酸循环，产生供给细胞生长增殖的能量和合成细胞生长所需用的各种成分。开放培养时般把细胞置于95%空气加5%二氧化碳混合气体环境中。

二氧化碳既是细胞代谢产物，也是细胞生长繁殖所需成分，它在细胞培养中的主要作用在于维持培养基的PH值。大多数细胞的适宜PH为7.2-7.4，偏离这范围对细胞培养将产生有害的影响。但细胞耐酸性比耐碱性大些，在偏酸环境中更利于细胞生长。有资料显示，原代羊水细胞培养PH6.8时适。

细胞培养液PH浓度的调节常用的为加NaHCO3的方法，因为NaHCO3可供CO2，但二氧化碳易于逸出，故适用于封闭培养，而羟乙基哌嗪乙硫磺酸(HEPES)因其对细胞无毒性，也起缓冲作用，有防止PH迅速变化的特性而用于开放细胞培养技术中，其大优点是在开放式培养或细胞观察时能维持较恒定的PH值。

4、细胞培养基

培养是既是培养细胞中供给细胞营养和促使细胞生殖增殖的基础物质，也是培养细胞生长和繁殖的生存环境。培养基的种类很多，按其物质状态分为半固体培养基和液体培养基两类;按其来源分为合成培养基和天然培养基。

(1)合成培养基：合成培养基是根据细胞所需物质的种类和数量严格配制而成的。内含碳水化合物、氨基酸、脂类、无机盐、维生素、微量无素和细胞生长因子等。单独使用细胞虽有生存但不能很好的生长增殖。

(2)天然培养基：使用普遍的天然培养基是血清，基本以小牛血清普遍。血清由于含有多种细胞生长因子、促粘附因子及其多种活性物质。与合成培养基合用，能使细胞顺利增殖生长。常见使用为5-20%。