【药典规定的支原体检查法】

支原体严重影响培养中的细胞的表型特征和正常生长，给药品质量安全控制带来了大的风险。因此，细胞培养过程中的支原

体检测非常必要。FDA、WHO等不同国家和地区监管机构和USP、EP、ChP等法规均有支原体检查的规定，主要包括测试细胞库

（主细胞库、工作细胞库），收获的下游细胞培养物，终产品及对照细胞等是否存在支原体污染。

《中国药典》2020版第三部3301支原体检查法中规定，主细胞库（MCB）、工作细胞库（WCB）、病毒种子批、对照细胞以

及临床治疗用细胞应进行支原体检查。现行《中国药典》规定的方法仍然是直接培养法和指示细胞法（DNA染色法），这两种方法

周期较长（直接培养法21天，指示细胞法3-4天），无法满足药物放行的时间要求。

《欧洲药典》除了这两种方法法外，还推荐核酸检测法(NAT法)。同时规定，经过合理的方法学验证，NAT法可用于替代直接培

养法（10cfu/mL）和指示细胞法(100cfu/mL)。

【支原体qPCR检测试剂盒已完成方法学验证】

上海公司委托第三方业检测机构完成了细胞支原体检测试剂盒方法学验证！该验证项目依据欧洲药典推荐的核酸检测支原体检

查法验证方案，对试剂盒的属性、检测限和耐用性进行了验证。结果表明，细胞支原体检测试剂盒这三方面特性均符合要

求，检测灵敏度为10cfu/mL，可替代培养法，用于细胞存储库、细胞治疗用途的细胞和生物制品中支原体污染检测和放行检测。

【产品规格】

  【产品说明】

   本产品试剂盒采用双色荧光qPCR(TaqMan探针法)检测支原体DNA，检测对象为细胞培养的上清液或细胞本身。该试剂盒具有以下特点：

   1.灵敏：100拷贝的支原体可被检出。

   2.稳定：全程闭管操作，无交叉污染。

   3.可靠：含内参基因，避免假阴性。

   4.方便：操作简单，无需电泳步骤。

   5.定量：以CT值判断，可定量检测。

  【运输及保存条件】

  低温冷冻运输， -20℃保存，有效期1年。

  【产品组分】

   注：本试剂盒提供试剂，使用先低速离心、后小心开启。使用时请上下轻柔颠倒十次混匀，避免起泡，并低速短暂离心后使用。

  【操作步骤】

  1. 细胞样品制备，取 1~1.5mL 细胞培养上清，1000 rpm 离心3 分钟，取 2µL上清作为模板备用；

  2.根据支原体检测说明书进行混合试剂，配置检测体系；

3.将反应罐放置再荧光PCR扩增仪上，根据产品说明书上的反应条件进行反应。

  【灵敏度测试和结果判读】