提供者:上海松茸生物科技有限公司 发布时间:2023/7/4 15:56:25 阅读次数:46次 进入该公司店铺
Hi- Primers介绍
医学时代,靶向特异区段重测序的需求日益增加,样本量常达上千个,只用传统的Sanger法或目标区域杂交捕获测序价格昂贵。因此基于超高重PCR的扩增子捕获测序应对该区段范围适用性强,针对连续区段,外显子靶标以及客户位点,特异设计优化捕获引物,多重PCR一次捕获所有位点,提供预混引物以及反应试剂,方便客户自行实验。
上海松茸生物超高重PCR建库技术,利用自主开发的多重PCR引物设计软件,结合知识密集型的多重PCR优化技术,克服扩增效率不均一问题,每个扩增子间拷贝数的均一性(利用ABI 7900定量PCR检测多重PCR产物,根据ct值判读产物浓度,确保产物间的均一性)。
使用超高重PCR建库试剂盒Hi- Primers,在建库过程中引物端自动加上区分样本barcode,无需二次建库,两轮PCR完成整个建库过程。试剂盒内容包含:靶向捕获特异性引物Mix,测序平台定制接头,纯化试剂,扩增反应体系等。只需拥有自己的测序平台,Hi- Primers帮您完成建库所有问题。
应用域:孟德尔遗传性疾病的筛查和诊断,医疗研究与应用等。
试剂盒适用测序平台
Hi- Primers建库流程示意图
试剂盒定制流程
引物设计:根据客户需求(对连续区段,外显子靶标以及客户位点),基于超高重PCR的扩增子捕获测序,利用上海松茸生物自主开发的引物设计软件,设计特异性捕获引物。
引物优化:利用多重PCR引物优化技术,使扩增子间均一性好,每个扩增子间拷贝数差异控制在平均深度的5~10倍以内(利用ABI 7900定量PCR检测多重PCR产物,根据ct值判读产物浓度,确保产物间的均一性),90%扩增子reads数大于15,不浪费测序通量。
试剂盒组成:试剂盒包含包含从扩增到建库到测序纯化所用到的所有内容,购买一个试剂盒即可完成整个建库过程。
试剂盒内容组成
序列 | 内容 |
1 | Hi -Primers建库试剂盒操作说明书 |
2 | 引物序列信息 |
3 | 定量PCR质检报告 |
4 | 特异性捕获引物Mix(提供1000 Sample预混引物) |
5 | 上下游标签引物 |
6 | 阴性/阳性对照DNA |
7 | PCR扩增反应体系 |
试剂盒参数
试剂盒参数 | |
DNA样本 | DNA浓度15ng/ul,浓度5-15ng/ul需提说明 |
均一性 | 95%扩增子测序深度在0.2X平均测序深度以上 |
覆盖度 | 100X平均测序深度,100%扩增子覆盖 |
适用平台 | Illumina Hiseq2500,Miseq,X10等主流测序平台 |
平均扩增子长度 | 约200bp(游离DNA<150bp) |
试剂盒实验流程
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