分光光度法50管/48样

正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义：

G6PDH（EC1.1.1.49）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，是磷酸戊糖途径的关键酶，催化6-磷酸葡萄糖氧化为6-磷酸葡萄糖酸内酯，同时将NADP⁺还原为NADPH，供

生物合成及维持细胞内的还原状态用。因此 6-磷酸葡萄糖脱氢酶活性的高低可以从一定程

度上反映出生物体的生物合成和抗氧化能力。

测定原理：

G6PDH催化NADP⁺还原生成NADPH，在340nm下测定NADPH增加速率。

需自备的仪器和用品：

紫外分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1mL石英比色皿、研钵、冰和蒸

馏水。

试剂的组成和配制：

提取液：60mL×1瓶，4℃保存；

试剂一：液体47.5 mL×1瓶，4℃保存；

试剂二：粉剂×1支，-20℃保存；

试剂三：粉剂×1支，-20℃保存；

样本的前处理：

1、细菌、细胞或组织样品的制备：

细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量

（10⁴个）：提取液体积（mL）为1000~5000：1 的比例（建议2000万细菌或细胞加入1mL

提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30

次）；8000g4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10 的比例（建议称取约0.1g组织，

加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。8000g4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

2、血清（浆）样品：直接检测。

测定步骤：

1、分光光度计预热30min以上，调节波长至340nm，蒸馏水调零。

2、将试剂二和试剂三转移至试剂一中充分溶解；在37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）

水浴10min以上；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。

3、在1mL石英比色皿中加入50μL样本和950μL试剂一，混匀后立即记录340nm处1min

后吸光值A1和6min 后的吸光值A2，计算ΔA=A2-A1。

注意：若ΔA大于0.5，需将酶液用提取液稀释，计算公式中乘以相应稀释倍数。或将反应

时间缩短至2min，使A2-A1小于0.5，可提高检测灵敏度。