信帆生物为您提供：PEG诱导细胞融合试剂盒的操作步骤

提供者：上海信帆生物科技有限公司   发布时间：2018/6/8 9:30:14  阅读次数：4323次  进入该公司店铺

产品简介：

细胞融合(cell fusion)是两个或两个以上细胞融合并形成一个细胞过程。在自然情况下，体内、体外发生的细胞融合的现象称为自然融合；体外培养的细胞可用人工方法诱导相同或者不同细胞间发生融合，称为人工诱导融合。体外培养的单层贴壁细胞或悬浮细胞均可以做融合，但成功概率较的是单层贴壁细胞。

聚乙二醇(Polyethylene glycol ,PEG)有众多品种，常见的有PEG400、PEG1500、PEG4000、PEG6000、PEG8000等，聚乙二醇系列产品无毒、无刺激性，味微苦，具有良好的水溶性，并与许多有机物组份有良好的相溶性，具有优良的润滑性、保湿性、分散性、粘接剂、抗静电剂及柔软剂等，在化妆品、制药、化纤、橡胶、塑料、造纸、油漆、电镀、农药、金属加工及食品加工等行业中均有着为广泛的应用。其中PEG4000和PEG6000常用于促进细胞融合或原生质体融合并有助于生物体(如酵母菌)在转化中摄入DNA。

PEG诱导细胞融合试剂盒主要由PEG诱导溶液、HAT Media Supplement组成，其作用原理使能够改变各类细胞的膜结构，使两细胞接触点处质膜的脂类分子发生疏散和重组，两细胞接口处在双分子层质膜的相互亲和以及彼此的表面张力作用下，细胞发生融合，获得生产单克隆抗体的杂交瘤细胞，诱导细胞杂交。该试剂经严格无菌处理，仅用于科研领域，不用于临床诊断或治疗。

信帆生物为您提供：PEG诱导细胞融合试剂盒的操作步骤

产品组成：

自备材料：

MEM培养基、胎牛血清

CO₂培养箱、离心机

胰蛋白酶消化液

操作步骤(仅供参考)：

1、 如果变成胶冻状，可37~60℃水浴使其变成溶液。

2、 单层贴壁细胞：将杂交前体细胞以相同数量(5×10⁴/ml)接种，以适当的培养基培养细胞，待细胞贴壁扩展至汇合成片(80%汇合率)的密度。吸干培养液，加入2ml PEG诱导溶液，轻轻转动1min使PEG诱导溶液覆盖所有细胞。静置1min，加入5ml完全MEM培养液以稀释PEG诱导溶液，吸干净稀释的PEG诱导溶液，再用5ml MEM培养液洗涤被PEG处理的细胞。吸干净洗液，加入5ml MEM培养液，37℃ 5%CO₂培养过夜。24~48h后先吸去培养液，加入胰酶消化液处理细胞，待细胞消化后吸除胰酶消化液，用HAT选择培养液(按HAT Media Supplement：含胎牛血清的RPMI 1640培养液=1：49配制)培养剔除HPRT和TK缺陷细胞。融合12~24h后进行异核体分析，杂交前体细胞在4~5天内发生死亡，对于多数融合前体细胞而言，10~14天可见杂交细胞克隆。

3、 悬浮细胞：将两种不同亲体的细胞各1ml(约为1×10⁷)混匀，800g离心10min以沉淀杂交前体细胞，弃上清液，使之剩余约1ml，手指轻弹管底或手摇离心管使两种细胞混匀并重新悬浮。在离心管中加入1ml PEG诱导溶液，置于37℃水浴2min，加入5ml提前37℃预热的含10%胎牛血清的MEM培养液，使PEG1000稀释并停止作用。1000g离心5min，弃上清液，加入5ml完全MEM培养液以稀释PEG诱导溶液，吸干净稀释的PEG诱导溶液。用5ml无血清MEM培养液，手摇离心管重悬细胞(不要破坏细胞)，1000g离心5min，弃上清液，重复1次该步骤。加入含有20%的胎牛血清的HAT选择培养液，混匀，将细胞悬液用培养液稀释至5×10⁴/ml,接种于96孔板(每孔0.1ml)或其他器皿中，37℃ 5%CO₂孵育过夜24~48h后选出融合细胞。

注意事项：

应注意无菌操作，避免被微生物污染。

PEG诱导溶液较为粘稠时，可37~60℃水浴使其变成溶液。

体外培养的单层贴壁细胞或悬浮细胞均可做融合，但成功概率较的是单层贴壁细胞。

有效期：6个月有效。

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