信帆生物教你正确使用鼠IL-1β elisa试剂盒_行业标准_仪器仪表技术文献

信帆生物教你正确使用鼠IL-1β elisa试剂盒

提供者：上海信帆生物科技有限公司发布时间：2018/3/27 14:54:39 阅读次数：4027次进入该公司店铺

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使用我司鼠IL-1β elisa试剂盒发表的文章如下：

《BMSCs移植对缺血性脑卒中鼠IL-1β、TNF-a表达的影响》

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目的骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem ceIIs,BMSCs）移植治疗脑中动脉阻塞(Middle CerebralArtery Occlusion，MCAO)模型鼠后，在不同时间点采用western blot、 ELISA方法检测IL-1β、TNF-α的表达变化，分析BMSCs移植对缺血性脑卒中后炎性因子的影响，探讨BMSCs移植治疗缺血性脑卒中修复受损神经功能的可能抗炎机制。

方法取幼年雄性SD鼠骨髓腔细胞，通过全骨髓培养法和细胞贴壁培养法体外分离、培养、扩增得到BMSCs，传至第4代，免疫荧光法鉴定，诱导分化为成骨细胞、脂肪细胞及神经干细胞并鉴定。取成年雄性SD鼠，用Longa线栓法制造MCAO模型。参考Bederson JB评分法测评鼠神经功能缺损，筛选入组MCAO模型鼠；TTC染色法显示脑组织梗死范围，剔除TTC（-）或有出血的鼠样本。取造模成功的MCAO模型鼠完全随机分为2组：A组/MCAO模型组（n=16），即建立MCAO模型后注射1ml生理盐水；B组/实验组（n=16），即建立MCAO模型后通过尾静脉注射法移植1ml2×l09/L BMSCs；A、B组各分为处理后1d、3d、7d、14d时间点亚组（n=4）。取正常鼠设C组/空白组（n=4），不予任何干预。各亚组行心脏取血，ELISA方法检测鼠血清IL-1β、TNF-α的表达变化；生理盐水灌注取脑，western blot方法检测鼠脑组织IL-1β、TNF-α的表达变化。

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结果1.成功培养得到BMSCs。镜下细胞形态：原代BMSCs呈圆形或类圆形，贴壁数量少；经过纯化、扩增，贴壁细胞增多，呈长梭形，集落样生长，局部呈漩涡状；至P7代，细胞逐渐老化，以扁平细胞为主。细胞免疫荧光法鉴定：CD54（+）、CD34（-），符合BMSC免疫表型特点。BMSCs诱导为成骨细胞见细小颗粒于培养液；诱导为脂肪细胞见红色脂滴于胞浆；诱导为神经干细胞见棕色颗粒于胞浆。2.鼠神经功能评分：造模后1天实验组评分较模型组无明显差异（P>0.05），3天、7天、14天实验组较模型组均有下降（P<0.05），差异有统计学意义。3.鼠血清IL-1β、TNF-α表达（单位：ng/L）：1天、3天、7天、14天各亚组：IL-1β浓度为模型组27.0±0.35、29.2±0.60、25.2±0.65、22.8±0.66，实验组25.2±0.31、26.8±0.56、20.8±0.39、19.2±0.94，空白组10.9±0.54；TNF-α浓度为模型组231±1.46、225±4.98、216±4.16、198±4.61，实验组189±2.85、178±3.17、166±5.27、157±6.03，空白组146±6.86；模型组较空白组均明显增多（P<0.05），实验组较模型组均减少（P<0.05），但较空白组仍增多（P<0.05）。

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模型组及实验组与空白组比较：IL-1β表达1天增多，3天达高峰，7天下降，14天持续下降，但仍高于空白组（P<0.05）；TNF-α表达1天增多达高峰，3天下降，7天、14天缓慢下降，但仍高于空白组（P<0.05），差异有统计学意义。4.鼠脑组织IL-1β、TNF-α表达（灰度值）：1天、3天、7天、14天各亚组：IL-1β为模型组5502±108.9、6267±160.5、4425±158.1、3352±187.1，实验组4217±143.7、4706±111.8、3235±150.7、2307±120.7，空白组1874±70.7； TNF-α为模型组7801±148.9、6296±170.7、5399±240.9、3458±180.2；实验组6468±180.9、5789±119.7、4647±207.3、2828±152.6，空白组2215±159.5；模型组较空白组均增高（P<0.05），实验组较模型组均降低（P<0.05）较空白组增高（P<0.05）。

模型组及实验组与空白组比较：IL-1β表达1天增高，3天达高峰，7天下降，14天持续下降但仍高于空白组（P<0.05）；TNF-α表达1天增高达高峰，3天下降，7天、14天缓慢下降，但仍高于空白组（P<0.05），差异有统计学意义。

结论1.缺血性脑卒中模型鼠中IL-1β、TNF-α表达增加，其神经损伤可能与炎症反应有关。2.骨髓间充质干细胞移植可降低MCAO模型鼠IL-1β、TNF-α的表达，其修复神经功能的作用可能与BMSC下调炎性因子减轻炎症反应有关。

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