信帆生物带你了解：Realtime PCR,实时荧光定量PCR检测服务服务内容 通过用SYBR荧光染料法 或者TaqMan荧光探针法，我们能为客户提供实时荧光定量PCR技术服务。同时我们将提供给客户完整的实验资料和分析步骤，客户只需提供标本和标本的基本信息。
实时荧光定量PCR检测服务客户须知：
1、客户须在实验开始前确保其提供材料的数量和质量，并提供相关信息，客户应当清楚要检测的成份是否足够稳定；2、尽可能新鲜和足量的组织（50-100mg）、细胞样品（106）或血清，或直接提供纯化好的总RNA（≥0.5μg/样品）；
3、提供已知的全长基因序列。所需要检测mRNA注册号和名称；
信帆生物带你了解：Realtime PCR,实时荧光定量PCR检测服务如果您对RT-PCR实验外包感兴趣，可联系上海信帆生物科技有限公司，联系方式见网页右上角的“联系我们”！
荧光定量 PCR 操作程序
1. 引物设计与合成
2. 提取 DNA/ RNA , 样本逆转录成cDNA
3. 进行Real Time PCR实验,进行实验结果分析
4. 实验完成后，提供完整的实验报告（含软件分析结果）及引物等实验材料
技术
1. 使用稳定的定量PCR仪
2. 核心试剂采用美国原装试剂，实验结果准确，重复性好。
3. 丰富的qPCR经验，基因类别有DNA、mRNA、miRNA等；物种类别有人、鼠、鸡、牧草、酵母菌、金黄色葡萄菌等。
服务承诺：
1、我方对实验结果以及客户所提供的资料保密，未经客户许可，我方不得将客户的实验内容、实验结果和相关信息对外公布。
2、本公司将在收到客户样本后并签订合同的第二个工作日起开始检测工作。
3、提供给客户原始实验数据以及详细的实验流程及报告。
梯度稀释的品及待测样品的管家基因（β-actin）实时定量PCR
1. β-actin阳性模板的梯度制备 阳性模板的浓度为1011，反应前取3 μl按10倍稀释（加水27 μl并充分混匀）为1010，依次稀释至109、108、107、106、105、104，以备用。
2. 反应体系如下：
品反应体系
序号 反应物 剂量
1 SYBR Green 1 染料 10 μl
2 阳性模板上游引物F 0.5 μl
3 阳性模板下游引物R 0.5 μl
4 dNTP 0.5 μl
5 Taq酶 1 μl
6 阳性模板DNA 5 μl
7 ddH2O 32.5 μl
8 总体积 50 μl
轻弹管底将溶液混合，6 000 rpm短暂离心。
3. 管家基因反应体系：
序号 反应物 剂量
1 SYBR Green 1 染料 10 μl
2 内参照上游引物F 0.5 μl
3 内参照下游引物R 0.5 μl
4 dNTP 0.5 μl
5 Taq酶 1 μl
6 待测样品cDNA 5 μl
7 ddH2O 32.5 μl
8 总体积 50 μl
轻弹管底将溶液混合， 6000 rpm短暂离心。
3. 制备好的阳性品和检测样本同时上机，反应条件为：93℃ 2分钟，然后93℃ 1分钟，55℃ 2分钟，共40个循环。
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