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小鼠叶酸(FA)酶联免疫分析试剂盒实验原理

提供者:上海谷研实业有限公司   发布时间:2017/2/28 14:34:22  阅读次数:224次  进入该公司店铺

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小鼠叶酸(FA)酶联免疫分析试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠叶酸(FA)水平。用纯化的小鼠叶酸(FA)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入叶酸(FA) ,再与 HRP 标记的叶酸(FA)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物 TMB显色。TMB在 HRP 酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的叶酸(FA)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD 值),通过标准曲线计算样品中小鼠叶酸(FA)浓度。
小鼠叶酸(FA)酶联免疫分析试剂盒操作步骤
1. 标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀
释。
8μg/L 5 号标准品 150µl的原倍标准品加入150µl标准品稀释液
4μg/L 4 号标准品 150µl的5 号标准品加入150µl标准品稀释液
2μg/L 3 号标准品 150µl的4 号标准品加入150µl标准品稀释液
1μg/L 2 号标准品 150µl的3 号标准品加入150µl标准品稀释液
0.5μg/L 1 号标准品 150µl的2 号标准品加入150µl标准品稀释液
2. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同) 、标准孔、
待测样品孔。 在酶标包被板上标准品准确加样50µl, 待测样品孔中先加样品稀释液40µl,然后再加待测样品10µl(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽
量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
3. 温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4. 配液:将30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水30 倍稀释后备用
5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置 30 秒后弃去,如此
重复 5次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶标试剂50µl,空白孔除外。
7. 温育:操作同3。
8. 洗涤:操作同5。
9. 显色:每孔先加入显色剂A50µl,再加入显色剂B50µl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色
15 分钟.
10. 终止:每孔加终止液 50µl,终止反应(此时蓝色立转黄色) 。
11. 测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD 值) 。 测定应在加终止
液后 15分钟以内进行。
操作程序总结:
小鼠叶酸(FA)酶联免疫分析试剂盒注意事项
1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30 分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未
用完,板条应装入密封袋中保存。
2.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。
3.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间最好
控制在5 分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。
4. 请每次测定的同时做标准曲线,最好做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD 值
大于标准品孔第一孔的OD 值) ,请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定,计
算时请最后乘以总稀释倍数(×n×5) 。
5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6.底物请避光保存。
7.严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9.本试剂不同批号组分不得混用。
10. 如与英文说明书有异,以英文说明书为准。

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