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分享重组质粒的连接、转化及筛选

提供者:上海谷研实业有限公司   发布时间:2017/11/7 10:27:41  阅读次数:610次  进入该公司店铺

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刘**
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材料、设备及试剂
  一、材料
  外源DNA段:自行制备的带限制性末端的DNA溶液,浓度已知;载体DNA:T-vector(Ampr,lacZ),自行提取纯化,浓度已知;宿主菌:E.coliDH5α,或JM系列等具有α-互补能力的菌株。
  二、设备
  恒温摇床,台式高速离心机,恒温水浴锅,琼脂糖凝胶电泳装置,电热恒温培养箱,电泳仪无菌,工作台,微量移液枪,eppendorf管。
  三、试剂
  1、连接反应缓冲液(10×):0.5mol/LTris?Cl(pH7.6),100mol/LMgCl2,100mol/L二硫苏糖醇(DTT)(过滤灭菌),500μg/ml牛血清清蛋白(组分V.Sigma产品)(可用可不用),10mol/LATP(过滤灭菌)。
  2、T4DNA连接酶(T4DNAligase);购买成品。
  3、X-gal储液(20mg/ml):用二甲基甲酰胺溶解X-gal配制成20mg/ml的储液,包以铝箔或黑纸以防止受光照被破坏,储存于-20℃。
  4、IPTG储液(200mg/ml):在800μl蒸馏水中溶解200mgIPTG后,用蒸馏水定容至1ml,用0.22μm滤膜过滤除菌,分装于eppendorf管并储于-20℃。

  5、含X-gal和IPTG的筛选培养基:在事先制备好的含50μg/mlAmp的LB平板表面加40mlX-gal储液和4μlIPTG储液,用无菌玻棒将溶液涂匀,置于37℃下放置3-4小时,使培养基表面的液体完全被吸收。

银杏内酯C HPLC≥98% GinkgolideC 20mg/支
白果内酯 HPLC≥98% Bilobalide 20mg/支
斑蝥素 HPLC≥98% Cantharidin 20mg/支
去甲斑蝥素 HPLC≥98% Norcantharidin 20mg/支
植酸 HPLC≥98% Phytic acid 20mg/支
龙胆苦苷 HPLC≥98% gentiopicrin 20mg/支
胆酸 HPLC≥98% Cholic acid 20mg/支
猪去氧胆酸 UV≥98% Hyodeoxycholic acid 20mg/支

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