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看你对Schiff氏试剂显色的了解

提供者:上海信帆生物科技有限公司   发布时间:2016/12/29 14:39:03  阅读次数:7050次  进入该公司店铺

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Schiff 试剂,中文全称为:品红醛试剂,主要用于生物学实验中鉴定DNA的存在。
Schiff 试剂是由碱性品红和亚硫酸钠配制而成。可以和醛基反应形成紫红色的溶液。在生物实验可以和经过酸化的DNA 发生反应,DNA 被染成紫红色,而不和核仁,细胞质发生反应,因此可以来鉴定DNA的存在。
称取0.5g碱性品红加入到100ml煮沸的
蒸馏水中(用三角瓶),时时振荡,继续煮5min(勿使之沸腾),充分溶解。然后冷却致50℃时用滤纸过滤,滤液中加入10ml1mol/LHCl,冷却致25℃时,加入0.5g偏重亚硫酸钠(Na2S2O5)或偏重亚硫酸钾(K2S2O5),充分振荡后,塞紧瓶塞,在室温暗处静置至少24h(有时需要2至3天),待溶液红色褪去,呈现无色或淡黄,然后加入0.5g活性碳,用力振荡一分钟,后用粗滤纸过滤于棕色瓶中,封瓶塞,外包黑纸。滤液应为无色也无沉淀,贮于冷暗处(如4℃冰箱中)备用,可保持数月或更长时间。如有白色沉淀,就不能再使用,如颜色变红,可加入少许偏生亚硫酸钠或钾,使之再转变为无色时,仍可再用。
schiff试剂染色DNA时需在避光条件下进行。与shiff试剂反应的DNA,必须是被
解离过的,因为显色原理是DNA中醛基与无色品红结合得到,而完整双链DNA也无醛基的,只有被水解后碱基与脱氧核糖之间的键打开,才会在脱氧核糖上形成游离醛基。因此schiff常与过碘酸试机合用,过碘酸用以把脱核糖和糖类的羟基氧化成醛基,从而使得schiff碱得以与之结合,这正是PAS染色的基本原理。
希夫试剂遇醛类都显紫红色吗? 关于这个问题,许多有机化学书上都是这样叙述的:“希夫试剂又称品红醛试剂,它与醛类作用显紫红色,反应很灵敏,而酮类不与希夫试剂作用,因此希夫试剂常用于鉴别醛和酮”。
希夫试剂(Schiff)又称品红亚硫酸试剂。品红是一种红色染料,将二氧化硫通入品红水溶液中,品红的红色褪去,得到的无色溶液称为品红亚硫酸试剂。它能跟醛作用显紫色,与酮作用不显色。这一显色反应非常灵敏,可用于鉴别醛类化合物。使用这种方法时,溶液中不能存在碱性物质和氧化剂,也不能加热,否则会消耗亚硫酸,溶液恢复品红的红色,出现假阳性反应。

上海信帆生物公司主要产品:
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