细胞凋亡检测方法——DNA片段原位标记_分析方法_仪器仪表技术文献

细胞凋亡检测方法——DNA片段原位标记

提供者：南京金益柏生物科技有限公司发布时间：2016/8/24 13:59:10 阅读次数：602次进入该公司店铺

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凋亡细胞DNA片段原位末端检测技术是指在细胞（或组织）结构保持不变的情况下，用荧光素、或生物素标记的脱氧尿三磷（deoxyuridinetriphate,UDTP）和末端脱氧核苷酸转移酶（terminal deoxynucleotidy1 transferase,TdT）相反应与凋亡细胞裂解后3＇的羟基（-OH）端相结合经显色反应后检测DNA裂解点的技术。

DNA片段原位标记法有两种：（1）原位缺口转移（in situ nick-translation,ISNT）技术，该技术是1994年由Fehsel等提出，它是利用DNA多聚酶I将标记的核苷酸接到断裂的3＇-OH端；（2）原位缺口末端原位标记技术（in situ end labelling technique,ISEL）, 该技术即TUNEL法,于1993年由Wijsman等提出，它是利用TdT将标记DUTP接到3＇-OH端。研究证明，TUNEL的敏感性远高于尤其对早期凋亡的检出TUNEL更为适用。其原因可能是凋亡发生时DNA大多是双链同时断裂而单链断裂少见。ISNT是依赖DNA多聚酶I的单链修复反应，故阳性率较低。细胞凋亡时DNA断裂早于形态学改变及DNA含量减少。因此该法较前述各法具有更高的灵敏性，但环死细胞亦有DNA裂点形成。因此环死亦可呈TUNEL阳性反应。

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