实验室细胞收集的具体方法步骤_技术交流_仪器仪表技术文献

实验室细胞收集的具体方法步骤

提供者：南京金益柏生物科技有限公司发布时间：2016/10/12 9:46:51 阅读次数：1931次进入该公司店铺

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实验室细胞收集的具体方法步骤,实验室收集细胞，对于细胞的研究极为重要，如何收集细胞成为实验室的必做项目之一，那么下面金益柏的博士就带大家一起来了解下以下三种方法：
　　WB收集细胞：

　　将细胞培养基弃掉，用PBS清洗两次，使用胰酶消化细胞或细胞刮，将细胞悬浊液离心1000rpm/5min，弃上清，保留底层细胞。如要裂解细胞6孔板（99ulRIPA+1ulPMSF）,细胞培养皿（198ulRIPA+2ulPMSF），若要做磷酸化蛋白则加如1ul抑制磷酸化蛋白降解抑制剂，加入细胞裂解液后用移液器将细胞吹匀，冰上静置5min，离心4℃ 12500g/5min，吸取上清液，置于-80℃冰箱；若不裂解细胞，将细胞置于-80℃冰箱。

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普通PCR收集细胞：
　　将细胞培养基弃掉，用PBS清洗两次，使用胰酶消化细胞或细胞刮，将细胞悬浊液离心1000rpm/5min，弃上清，保留底层细胞。将细胞置于-20℃冰箱。
qRT-PCR收集细胞：
　　将细胞培养基弃掉，用PBS清洗两次，使用胰酶消化细胞或细胞刮，将细胞悬浊液离心1000rpm/5min，弃上清，保留底层细胞。加入1ml TRIZOL,置于-80℃冰箱。（注意：本实验需使用耗材和试剂都为无RNA酶，PBS必须高压，离心管和枪头必须无酶）