盐析法分离抗体注意问题_技术研讨_仪器仪表技术文献

盐析法分离抗体注意问题

提供者：南京金益柏生物科技有限公司发布时间：2016/8/22 9:49:10 阅读次数：795次进入该公司店铺

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金益柏技术人员在用盐析法分离抗体时总结出的注意点：
盐析法分离抗体注意问题：
1、盐的饱和度：盐的饱和度是影响蛋白质盐析的主要因素，不同蛋白质的盐析要求盐的饱和度不同。分离几个混合组分的蛋白质时，盐的饱和度常由低到高逐渐增加，每出现一种蛋白质沉淀进行离心分离后，再继续增加盐的饱和度，使第二种蛋白质沉淀。如用硫酸盐盐析分离血浆蛋白，当饱和度达到20%时，纤维蛋白原首先析出；饱和度增至28%~33%时，优球蛋白析出；饱和度达到33%~50%时，球蛋白析出；饱和度大于50%以上时，清蛋白析出，免疫球蛋白常在饱和度在33%开始析出。
2、pH值：在等电点时，蛋白质溶解度最小，容易沉淀析出。因此，盐析时除个别特殊情况外，pH值常选择在被分离的蛋白质等电点附近。
3、蛋白质浓度：在相同盐析条件下，蛋白质浓度越高越易沉淀，高浓度虽对沉淀有利，但浓度过高，也容易引起其他蛋白的共沉淀，因此，必须选择适当浓度，尽可能避免共沉淀作用的干扰。
4、温度：由于高浓度的盐溶液对蛋白质有一定保护作用，盐析操作一般可在室温下进行，但在使用某些中性盐进行盐析时，温度对盐溶解度的影响比较明显。
5、脱盐：蛋白质用盐析沉淀分离后，常需要脱盐才能获得纯品。最常用的脱盐方法是透析。通过透析袋内外的离子交换，最后使透析袋内溶液的盐浓度与外界相一致。