1.抗菌药物储存液制备 抗菌药物储存液浓度不该低于1000μg/ml(如1280μg/ml)或10倍于最高测定浓度。溶解度低的抗菌药物可稍低于上述浓度。抗菌药物直接购自厂商或有关组织。所需抗菌药物溶液量或粉剂量可公式进行核算。例如：需制作100 ml浓度为1280μg/ml的抗生素储存液，所用抗生素为粉剂，其药物的有用力为750μg/mg。用分析天平精确称取抗生素粉剂的量为182.6 mg。依据公式核算所需稀释剂用量为：（182.6 mg×750μg/ml）/1280μg/ml=107.0ml，然后将182.6 mg抗生素粉剂溶解于107.0ml稀释剂中。制备抗菌药物储存液所用的溶剂和稀释剂见表5。制作好的抗菌药物储存液应储存于-60℃以下环境，保存期不超越6个月。
2.药敏实验用抗菌药物浓度规模 依据NCCLS抗菌药物灵敏性实验操作规范，药物浓度规模应包括耐药、中介和灵敏分界点值，特殊状况破例。
3. 培育基 NCCLS引荐运用Mueller-Hinton（MH）肉汤，pH7.2~7.4。需氧菌及兼性厌氧菌在此培育基中成长杰出。在测验葡萄球菌对苯唑西林的灵敏性时，应在肉汤中参加2%（W/V）氯化钠，按制作厂家的请求制作需要量的MH肉汤。嗜血杆菌属菌运用HTM肉汤，肺炎链球菌和其它链球菌运用含2%~5%溶解马血的MH肉汤。
4.接种物的制备 有2种办法制作接种物，一是细菌成长办法，用接种环挑取形状类似待检菌落3-5个，接种于4-5ml的水解酪蛋白（MH）肉汤中，35℃孵育2-6h。增菌后的对数成长期菌液用生理盐水或MH肉汤校正浓度至0.5麦氏比浊规范，约含1~2×108CFU/ml。二是直接菌落悬液制作法，对某些苛养菌，如流感嗜血杆菌、淋病奈瑟菌和链球菌及甲氧西林耐药的葡萄球菌等菌株，引荐直接取培育18~24h的菌落调配成0.5麦氏比浊规范的菌悬液。用MH肉汤将上述菌悬液进行1∶100稀释后备用。留意应在15分钟内接种完制作好的接种物，并取一份接种物在非选择性琼脂平板上传代培育，以查看接种物纯度。
5.稀释抗菌药物的制备及菌液接种 取无菌试管（13×100mm）13支，排成一排，除第1管参加1.6mlMH肉汤外，其他每管参加MH肉汤1ml，在第1管参加抗菌药物原液（如1280μg/ml） 0.4ml混匀，然后汲取1ml至第2管，混匀后再汲取1ml至第3管，如此连续倍比稀释至第11管，并从第11管中汲取1ml弃去，第12管为不含药物的成长对照。此刻各管药物浓度依次为256、128、64、32、16、8、4、2、1、0.5、0.25μg/ml。然后在每管内参加上述制备好的接种物各1ml，使每管终究菌液浓度约为5×105CFU/ml。第1管至第11管药物浓度分别为128、64、32、16、8、4、2、1、05、0.25、0.125μg/ml。
6.孵育 将接种好的稀释管塞好塞子，置35℃一般空气孵箱中孵育16~20h；嗜血杆菌和链球菌在一般空气孵箱中孵育20~24h；对也许的耐甲氧西林葡萄球菌和耐万古霉素肠球菌应继续孵育满24h。
7.成果判别与解说 在读取和陈述所测验菌株的MIC前，应查看成长对看管的细菌成长状况是不是杰出，一起还应查看接种物的传代培育状况以确定其是不是污染，质控菌株的MIC值是不是处于质控规模。以肉眼调查，药物最低浓度管无细菌成长者，即为受试菌的MIC。甲氧苄胺嘧啶或磺胺药物的肉汤稀释法结尾判别，与阳性成长对看管对比按捺80%细菌成长管药物浓度为受试菌MIC。
依据NCCLS引荐的分界点值规范，判别耐药（resistant, R）、灵敏(susceptible, S)或中介（intermediate, I）。S表明被测菌株所导致的感染能够用该抗菌药物的常用剂量医治有用，禁忌症除外。R指该菌不能被抗菌药物的常用剂量在组织液内或血液中所达到的浓度所按捺，或归于具有特定耐药机理（如β-内酰胺酶），所以临床医治作用欠安。I是指MIC接近药物的血液或组织液浓度，效果低于灵敏菌。还表明被测菌株能够通过进步剂量（如β-内酰胺类药物）被按捺，或在药物生理性浓集的部位（如尿液）被按捺。别的，中介还作为“缓冲域”，以避免由微小的技能要素失控，所导致较大的过错解说。
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