细胞融合是人工定向制造新细胞品系的重要手段，也是制造单克隆细胞系的关键技术。在保证有良好的亲本细胞、稳定和良好的培养体系的条件下，细胞融合的成败和融合率则取决于融合剂和操作技巧。细胞融合的助融剂和助融手段主要有三种；
生物学方法：用仙台病毒或鸡新城疫病毒作助融剂。
物理学方法：用电融合仪发出的脉冲电流使相邻的两细胞穿孔而融合。
化学方法：用聚乙二醇或血卵磷脂作助融剂。
PEG作助融剂是比较方便简单的操作方法，具体方法如下：
一、实验材料
1.1 眼科镊子、剪刀数把、固定板。
1.2 37℃温水。
1.3 酒精灯、离心管架、离心管、5-10ml吸管、1ml吸管、滴管、计数池、平皿数个。
二、实验试剂
2.1 融合剂：50%PEG W=3000
PEG3000 1g
RPMI1640 1ml
8-10磅灭菌
2.2 基础培养液（RPMI1640）
RPMI1640 一包 (10.4g)
L-G （L-谷氨酰胺） 0.3g
HEPES 3.0g
碳酸氢钠 3.0g
庆大霉素 一支
三蒸水加至 1000ml
2.3 1640完全培养液
基础培养液 180ml
胎牛血清 20ml
2.4 HT培养液（终浓度H为1×10-4M，T为1.6×10-5M）
基础培养液 197.5ml
HT浓缩液（100×） 2.5ml
胎牛血清 50ml
一次融合约配250毫升
2.5 HAT培养液（终浓度A为4×10-7M）
基础培养液 197.5ml
HAT浓缩液（100×） 2.5ml
胎牛血清 50ml
2.6 细胞冻存液
1640完全培养液 70ml
DMSO 10ml
胎牛血清 20ml
2.7 3%醋酸溶液
30%乙酸 10ml
dH2O 90ml
三、实验步骤
3.1 脾细胞制备：取加强免疫小鼠一 只，眼眶采血后脱臼处死，在75%酒精中消毒后取脾脏，去除结缔组织，制备脾细 胞悬液，转移到50ml离心管中，加RPMI1640至30ml，1500~2000rpm离心5分钟，弃上清，加RPMI1640至30ml，白细胞稀 释液稀释20倍，计数，取1×108个细胞待用。
3.2 骨髓瘤细胞制备：取3瓶生长状态良好的（活细胞数>95%）骨髓瘤细胞，将之完全吹下，转移到50ml 离心管中，加RPMI1640至30ml，1500~2000rpm离心5分钟，弃上清，加RPMI1640至30ml，RPMI1640稀释10倍，计 数，取2×107个细胞待用。
3.3 细胞混合：脾细胞:骨髓瘤=5：1，混合，1500~2000rpm离心5分钟。
注 意：由于细胞融合是个随机过程，母细胞比例不一，会影响融合产物；或是两种母细胞融合而成的杂交细胞，或是一种细胞自身融合产物。多数实验者采用骨髓瘤 细胞：脾细胞＝1：5，也有人采取其他比例，如骨髓瘤细胞：脾细胞＝1：5，甚至是1：1。减少脾细胞用量目的是降低脾细胞自身融合的机率。
3.4 细胞融合：将离心上清倒干，把沉淀细胞块弹成糊状，置37℃水浴，
在1分钟内加入1ml融合剂，并搅拌细胞，37℃水浴放置 45秒，
在1分钟内加入1ml 1640并搅拌细胞终止融合剂的融合作用，500rpm离心7分钟，弃上清。
2分钟内加入5ml 1640并搅拌细胞
2分钟内加入10ml 1640并搅拌细胞
2分钟内加入10ml 1640并搅拌细胞
3.5 细胞培养：轻轻将细胞弹匀，缓缓加入HAT培养液至所需体积，将细胞重悬，轻轻地将之混匀，加到预先准备好的饲养细胞板中。 10ml吸管滴加1滴（配8ml/板），排枪滴加80~100微升（配10ml/板），37℃，CO2培养箱培养、观察。
3.6 细胞培养、换液：细胞融合后第一天开始，对细胞进行仔细观察，记录好细胞的生长状态、每孔杂交细胞瘤个数、块数、培养液有无污染、饲养细胞的状况。培养3~5天HAT培养液换液一次，10天换HT培养液培养至20天，换1640完全培养液。
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