主要用途
YIJI 组织染色质免疫沉淀分析（CHIP）试剂是一种旨在通过甲醛交联、物理或化学处理细胞核以及
染色质，从而运用特异抗体结合免疫沉淀，然后萃取 DNA，扩增分析，来确定结合蛋白的目标 DNA 序列
的权威而经典的技术方法。该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。其适用于 DNA 复制、重
组、修复、转录、病毒组装中的 DNA 和蛋白质（包括转录因子、聚合酶、组蛋白等）的相互作用的研究。
广泛应用于定性检测各种动物组织 DNA 蛋白结合序列和定量检测序列特异性 DNA 结合蛋白（例如转录因
子）及其突变形成等。产品即到即用，性能稳定，操作便捷，反应敏感，结合显著，重复性好。
技术背景
DNA 和蛋白质的相互作用是调控细胞反应过程的要素之一。染色质免疫沉淀分析方法（chromatin
immunoprecipitation；CHIP）是研究活体内（in vivo）DNA 和蛋白质的相互作用的最新最有力的工具：用
于分析染色质结构动力学、转录因子调节、以及表观遗传学变异等。CHIP 技术通过三大步骤实现：第一，
甲醛固定后染色质分离和断片；第二，运用特异蛋白之抗体，免疫共沉淀结合蛋白（包括转录因子、聚合
酶、组蛋白等）的染色质片断；第三，分析目标 DNA 和蛋白的修饰。其中转录因子作为调节蛋白，通过
结合核 DNA，以达到控制基因表达。
组织染色质免疫沉淀分析（CHIP）试剂盒产品内容
YIJI 清理液（Reagent A） 毫升
YIJI 固着液（Reagent B） 毫升
YIJI 终止液（Reagent C） 毫升
YIJI 裂解液（Reagent D） 毫升
YIJI 核溶液（Reagent E） 毫升
YIJI 稀释液（Reagent F） 毫升
YIJI 结合液（Reagent G） 毫升
YIJI 低盐液（Reagent H） 毫升
YIJI 高盐液（Reagent I） 毫升
YIJI 平衡液（Reagent J） 毫升
YIJI 缓冲液（Reagent K） 毫升
YIJI 洗脱液（Reagent L） 毫升
YIJI 解联液（Reagent M） 毫升
YIJI 酶解液（Reagent N） 毫升
YIJI 萃取液（Reagent O） 毫升
YIJI 浓缩液（Reagent P） 毫升
YIJI 沉淀液（Reagent Q） 毫升
YIJI 净化液（Reagent R） 毫升
YIJI 扩增液（Reagent S） 毫升
YIJI 补充液（Reagent T） 毫升
产品说明书 1份
组织染色质免疫沉淀分析（CHIP）试剂盒保存方式
保存 YIJI 裂解液（Reagent D）YIJI 核溶液、（Reagent E）YIJI 稀释液、（Reagent F）YIJI、
结合液（Reagent G）、YIJI 解联液（Reagent M）、YIJI 酶解液（Reagent N）、YIJI 萃取液
（Reagent O）、YIJI 浓缩液（Reagent P）和 YIJI 扩增液（Reagent S）在－20℃冰箱里，其余的
保存在 4℃冰箱里； 有效保证 6 月
用户自备
特异抗体：用于目标蛋白的结合
特异引物：用于目标 DNA 的扩增或测序
1.5 毫升离心管：用于样品反应操作和保存的容器
毫升离心管：用于样品反应操作和保存的容器
15 毫升锥形离心管：用于样品处理的容器
50 毫升锥形离心管：用于组织处理的容器
恒水槽：用于孵育反应物
震荡器：用于混匀反应物
4℃微型台式离心机：用于沉淀样品
4℃台式离心机：用于沉淀样品
平式摇荡仪或摇床：用于孵育和混匀反应
DOUNCE 匀浆器：用于裂解组织细胞
超声仪：用于裂解组织细胞核
PCR 仪：用于扩增反应
电泳仪：用于检测扩增产物
组织染色质免疫沉淀分析（CHIP）试剂盒实验步骤
实验开始前，准备好待测动物的预处理：药物处理等。同时将－20℃保存的试剂置于冰槽里融化。然后进
行下列操作。
一、 组织细胞核分离
1． 手术取出动物组织，并秤重以确定组织重量
2． （选择步骤）放进预冷的
3． （选择步骤）加入适量的（
4． 即刻用刀片切碎组织
5． 或置于液氮管过夜，次日取出后，即刻（最快速度）碾碎组织成粉末（注意：切莫使组织冻融）
6． 放进
7． 加入
9． 加入
毫升锥形离心管
毫升室温预热的 YIJI 固着液（Reagent B）
微升室温预热的 YIJI 终止液（Reagent C）
毫升锥形离心管
克组织需要
毫升）YIJI 清理液（Reagent A）清洗 1 次
8． 平放置于摇床，室温下（25℃）孵育 15 分钟，速度为 100RPM
10．继续平放置于摇床，室温下（25℃）孵育 5 分钟，速度为 100RPM
2

11．放进台式离心机离心 5 分钟，速度为 1000g
12．小心抽去上清液
13．加入
毫升预冷的 YIJI 清理液（Reagent A），混匀
14．放进 4℃台式离心机离心 5 分钟，速度为 1000g
15．小心抽去上清液
16．重复实验步骤 13 至 15 二次
17．加入
毫升预冷的 YIJI 裂解液（Reagent D），混匀
18．涡旋震荡 5 秒，充分混匀
19．置于冰槽里孵育 10 分钟
20．即刻放入预冷的 DOUNCE 匀浆器
21．在冰槽里用研磨棒匀化组织（约 80 下）（注意：参见注意事项 6）
22．将所有组织匀浆物移入 15 毫升锥形离心管
23．放进 4℃台式离心机离心 10 分钟，速度为 1500g
24．小心抽去上清液
25．加入
毫升 YIJI 核溶液（Reagent E），混匀颗粒群
26．置于冰槽里孵育 10 分钟
27．置于 200 瓦超声仪下，功率 50％，猝击 20 秒，间隙 10 秒冷却，重复 3 次（注意：根据 DNA 片段大
小，增加超声次数）
28．放进 4℃台式离心机离心 10 分钟，速度为 10000g
29．小心移取上清液分装到 10 个 2 毫升离心管（100 微升/管）
30．其中： 1）选择 1 管进行 1：50 稀释后，测定 OD260，确定 DNA 含量，使所有样品的检测浓度调整
一致（注意：建议 OD260＝0.1 为佳）
2）或选择 1 管进行蛋白浓度检测，使所有样品的检测浓度调整一致（注意：蛋白总量 1 至 5
毫克为佳；建议使用 YIJI Bradford 蛋白质浓度定量试剂盒－YJ30030.1）
3）或选择 1 管进行去交联以及电泳鉴定超声处理的 DNA 片段（0.3 至 1.5kb）（注意：参见
注意事项 7）
31．选择 1 管继续后续操作，其余的保存在－70℃冰箱里
32．加入
二、 结合反应
微升 YIJI 结合液（Reagent G）
微升 YIJI 稀释液（Reagent F）
33．加入
34．平放置于 4℃摇床孵育 1 小时，速度为 100RPM
35．放进 4℃台式离心机离心 1 分钟，速度为 400g（或 2000RPM，例如 eppendorf 5415）
36．小心移取上清液到 2 个新的 2 毫升离心管（每管 500 微升：1 管为无抗体对照；1 管为抗体处理管）
37．加入 50 微升用户自备的特异抗体（总量为 5 微克）到抗体处理管
38．将对照和抗体管平放置于 4℃摇床孵育 16 小时，速度为 100RPM
39．加入
微升 YIJI 结合液（Reagent G）到抗体处理管
40．将对照和抗体管平放置于 4℃摇床孵育 2 小时，速度为 100RPM
41．将抗体管放进 4℃台式离心机离心 1 分钟，速度为 400g（或 2000RPM，例如 eppendorf 5415）
42．小心抽去上清液
43．加入
毫升 YIJI 低盐液（Reagent H）到抗体管，混匀
44．平放置于 4℃摇床孵育 5 分钟，速度为 100RPM
45．放进 4℃微型台式离心机离心 1 分钟，速度为 400g（或 2000RPM，例如 eppendorf 5415）
3

46．小心抽去上清液
47．加入
毫升 YIJI 高盐液（Reagent I）到抗体管，混匀
48．平放置于 4℃摇床孵育 5 分钟，速度为 100RPM
49．放进 4℃微型台式离心机离心 1 分钟，速度为 400g（或 2000RPM，例如 eppendorf 5415）
50．小心抽去上清液
51．加入
毫升 YIJI 平衡液（Reagent J）到抗体管，混匀
52．平放置于 4℃摇床孵育 5 分钟，速度为 100RPM
53．放进 4℃微型台式离心机离心 1 分钟，速度为 400g（或 2000RPM，例如 eppendorf 5415）
54．小心抽去上清液
55．加入
毫升 YIJI 缓冲液（Reagent K）到抗体管，混匀
56．平放置于 4℃摇床孵育 5 分钟，速度为 100RPM
57．放进 4℃微型台式离心机离心 1 分钟，速度为 400g（或 2000RPM，例如 eppendorf 5415）
58．小心抽去上清液
59．重复实验步骤 55 至 58 一次
60．加入
微升 YIJI 洗脱液（Reagent L）到抗体管，混匀
61．平放置于摇床，室温下孵育 15 分钟，速度为 100RPM
62．放进 4℃微型台式离心机离心 3 分钟，速度为 400g（或 2000RPM，例如 eppendorf 5415）
63．小心移取上清液到新的 2 毫升离心管
64．重复实验步骤 60 至 63 一次
65．小心移取上清液合并到上述 2 毫升离心管（注意：可以暂时停止，存放在－20℃，次日继续）
三、 DNA 萃取
66．分别加入
微升 YIJI 解联液（Reagent M）到抗体处理管和无抗体对照管，混匀
微升 YIJI 酶解液（Reagent N）
67．置于 65℃恒温水槽孵育 2 小时
68．分别加入
69．置于 55℃恒温水槽孵育 2 小时
70．室温下静置 15 分钟
71．分别加入
72．涡旋震荡 15 秒
73．放进微型台式离心机离心 5 分钟，速度为 16000g（或 13000RPM，例如 eppendorf 5415）
74．分别移出 450 微升上层液相溶液到 2 个新的 1.5 毫升离心管（注意：切莫触碰液相交界面上的白色膜
微升 YIJI 萃取液（Reagent O）（注意：使用前摇匀）
状物）
75．分别加入
76．分别加入
77．涡旋震荡 15 秒
78．放进微型台式微型离心机离心 15 分钟，速度为 16000g（或 13000RPM，例如 eppendorf 5415）（注意：
微升 YIJI 浓缩液（Reagent P）到新的离心管
毫升 YIJI 沉淀液（Reagent Q）
离心前做好方位标记，以便离心后观察管底沉淀颗粒）
79．小心抽掉上清液
80．分别加入
毫升 YIJI 净化液（Reagent R）
81．放进微型台式离心机离心 5 分钟，速度为 16000g（或 13000RPM，例如 eppendorf 5415）
82．小心抽掉上清液
83．空气中晾干沉淀颗粒群
84．分别加入
微升 YIJI 缓冲液（Reagent K）
4

85．溶解后放进－20℃冰箱保存
四、 PCR 扩增
86．将 YIJI 扩增液（Reagent S）和 YIJI 补充液（Reagent T）从－20℃冰箱里取出
87．置入冰槽里直至融化
88．针对一个样本，每次移出
微升 YIJI 扩增液（Reagent S）到 PCR 管
89．加入 2 微升上述结合实验中获得的 DNA 样品（总量 100 纳克）
90．分别加入 1 微升用户自备的特异性的引物 F 和引物 R（各 350 纳克或 25 微摩尔）
91．再加入
微升 YIJI 补充液（Reagent T）（反应总量为 25 微升）
92．即刻放进微型台式离心机瞬时离心 5 秒，速度为 500g（或 2000RPM；例如 eppendorf 5415）
93．加入 50 微升 PCR 级矿物油（注意：参见注意事项 7）
94．即刻进行热启动 PCR 反应：
温度（℃）
95
95
Tm
72
72
时间
2 分钟
30 秒
1 分钟
30 秒
5 分钟
1
35
循环
1
95．反应完毕后，移取 5 微升进行 1.5%琼脂糖凝胶电泳
96．如果进行测序鉴定，胶回收 PCR 产物（建议使用 YIJI 高质纯化一步法胶回收试剂盒；YJ20051.1）
97．分别移出 2 微升反应液到 2 个不同的新的 1.5 毫升离心管（每微升 100 纳克）
98．加入 1 微升用户自备的特异性巢式引物 F（每微升 350 纳克）到其中一个 1.5 毫升离心管，作好标记
99．加入 1 微升用户自备的特异性巢式引物 R（每微升 350 纳克）到另一个 1.5 毫升离心管，作好标记
100．
进行后续的直接测序反应
组织染色质免疫沉淀分析（CHIP）试剂盒注意事项
1． 本产品为 10 次（1 克组织样本）操作
2． 操作时，须戴手套
3． 固着处理必须在室温下进行，其余的操作均须在 4℃状态进行
4． 严格按照操作规程进行
5． 建议使用无抗体对照
6． 通常匀化次数为 80 下达到 80％的细胞裂解为理想状态，但不同的组织或细胞类型会存在差异。用户
可以通过显微镜观察 3 微升匀浆物的细胞裂解程度：完整细胞呈现发亮的圆环。低于 50％可以增加匀
化次数
7． 通常超声处理后的 DNA 片段大小为 0.3 至 1.5kb；如果使片段小于 1.0kb，增加超声次数或功率即可。
电泳鉴定前，加入 10 微升 YIJI 解联液（Reagent M）到 1 管 100 微升超声处理后样品，65℃孵
育 4 小时，移取 20 微升进行 1.0％琼脂糖凝胶电泳。其标准片段电泳图象如下：泳道 1 为 DNA 标准
样；泳道 2 为未经超声处理样品；泳道 3 为超声处理后样品；泳道 4 为强化超声处理后样品
5

8． 根据用户 PCR 仪的性能，决定是否加入矿物油（Mineral Oil）
9． 建议使用软件测算 Tm 温度；参考公式为 Tm=4（G+C）+2（A+T）
10．在－20℃冰箱里储存的产品避免反复冻融
11．本公司提供系列 CHIP 研究产品
质量标准
1． 本产品经鉴定性能长期稳定
2． 本产品经鉴定不含污染性蛋白酶和核酶