我们在做实验时，常会遇到elisa试剂盒显色淡灵敏度偏低的问题，以下是上海劲马生物科技有限公司资深技术根据历年来为客户做代测实验所作次的年终总结。根据切身实验所遇到的不同问题可能原因及其防止方法总结，仅供参考：

1．孵育反应时间不足

定时钟准确定时

2．洗涤时冲击力太大，洗涤液浸泡时间太长，洗涤次数增加

减少洗涤冲击力，按说明书要求保留洗涤时间，准确记住洗涤次数

3．显色剂滴加量不足或顺序颠倒，或混合后加入

滴加显色液时，滴瓶垂直向下，持力均匀，滴速不宜过快，先加显色剂A，反加显色剂B，不可将A、B液混合后加入

4．显色剂反应时间不足

准确定时

5．蒸馏水水质有问题

测定蒸馏水配制试剂对酶免疫法的影响

6．试剂盒在运输途中时间太长，温度太高

试剂盒置保温箱内运输，并放足够数量的冰块，尽量缩短运输时间

7．试剂、样品用前未能平衡

用前试剂、样品置室温平衡30分钟左右。

8．样品和NaN 3防腐，抑制了酶的反应

样品不能加NaN 3防腐

9．试剂盒超过有效期

超过效期试剂盒不要使用

10．试剂开启时间过长长菌

试剂开启后请尽量在短时间内用完

11．移液器吸量不足，移液抽吸排放太快，吸头内壁挂液太多或内壁不清洁

校正移液器，吸头要配套，每次装吸头要吻合紧密。移液不宜过快，排放应完全。吸头内壁要清洁，最好一次性使用。

12．恒温箱温度不足37℃或水浴锅水温度不足37℃）放入反应板时注意培养箱温度，及时调整，孵育反应期间开启不宜太多，影响温度平衡。
ELISA测定模式包括以下几种：双抗体夹心法、间接法、双抗原夹心法、IgM抗体捕捉法、竞争抑制法，其中竞争抑制法(HBeAb,HBcAb等采用)因受操作时差所引起的不公平竞争等因素的影响，结果重复性较差，质量较难控制。
　不同批次的ELISA试剂在制作过程中很难保证质量完全一致，即使是通过批批检的项目其检测结果也存在差异，因此必须选择和订购长批号的试剂，并保证保存条件。严格执行这一标准可以避免因试剂批号改变而重新建立质控体系及重新评估试剂的复杂过程，并且能够保证结果的稳定性；对于效期短、使用率低的试剂，应当小量分装，每次使用则取分装部分即可，避免反复冻融造成试剂的失效。
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