提供者：北京百奥莱博科技有限公司 发布时间：2015/10/26 10:20:30 阅读次数：1251次 进入该公司店铺
产品及特点 | 十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）不仅可用于检测蛋白质的相对分子质量，而且也是分离纯化蛋白质的重要工具之一，随着蛋白质技术的微量化，有必要从凝胶中回收蛋白质以用于制备抗体、免疫印迹、氨基酸组分分析或末端序列测定等。本产品就是专门为此用途开发的中量蛋白胶回收法，它具有下列特点： 1.简单，不需要复杂而昂贵的仪器（如电洗脱仪）。 2.适用于变性胶（SDS-PAGE）和非变性胶。 3.每次可以处理1 g的PAGE胶（具体多少蛋白质取决于上样的浓度）。 4.回收率一般在50-90%之间（跟蛋白质大小，洗脱时间相关）。 5.跟后续的实验兼容，包括2-D电泳、质谱测序等。 | ||||||||||
规格及成分 |
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运输及保存 | 常温运输，4℃保存，有效期一年。 | ||||||||||
自备试剂 | 无 | ||||||||||
使用方法 | 1. 按常规方法进行变性（SDS-PAGE）或非变性蛋白电泳。 2. 切取含目的蛋白的胶（尽可能地把多余的胶切除，否则会影响回收效率）。注意：固定和染色后蛋白回收效果很差，所以建议把样品分多孔上样，电泳后只切其中一个样孔的胶条进行固定和染色，然后将此胶条放回到在整体胶中原来的位置，通过显色胶条上的蛋白条带找到在未染色胶上对应区域，并切下此区域的胶进行回收。 3. 将切下的、重量不超过1克的胶块转移到30 mL塑料注射器中。 4. 用塑料注射器推杆将胶块从端口挤压出去，使之变成细小的碎片，用自备的15mL塑料离心管收集这些破碎的凝胶颗粒。 5. 加入1 mL溶液A，4℃摇晃洗脱至少2-16小时（过夜）。此时最好将将要使用的溶液B放在冰箱预冷。 6. 10,000 g离心10分钟，转移上清到新的10-15mL的塑料离心管中，注意不要吸取碎胶。 7. 加入5倍体积的预冷的溶液B，摇晃混匀。 8. -20℃放置至少10-30分钟。 9. 室温12,000 g（注意：一定要检查使用的离心管是否能够耐受次离心力，如果不能建议将溶液分到1.5 mL的塑料离心管中再进行离心处理）离心5-20分钟，弃上清。 10.室温充分晾干，得到的沉淀即为回收的蛋白质。回收的蛋白质可溶解在适当的缓冲液中，可用于后续实验（2-D电泳、质谱测序等）。 |
关联产品 | 微量蛋白胶回收试剂盒（CAT#: BTN90402） |
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