亲和力和特异性相对要低于单抗，且制备周期长，批间差异较大。而单抗仅针对抗体的单一表位，亲和力和特异性均较多抗高，且制备技术成熟，产量大，批间差异小，elisa试剂盒价格但结合位点的单一也正是其弱点之所在，在双抗体夹心法中，如包被和指示抗体使用同一单抗，则由于结合位点的缺乏，容易造成假阴．性结果。
在使用双单抗一步法时，应注意抗原过剩时的“钩状效应”固相载体 固相载体是 人ELISA试剂盒中用以分离结合标记物和游离标记物的主要手段，应与有良好的结合性能并且不改变其免疫活性。常用的固相载体有聚苯乙烯塑料和硝酸纤维素膜。
ELISA试剂盒价格上式中DH2为供氢体（即底物），H2O2为受氢体。HRP对受氢体的专一性很高，除H2O2外，仅作用于小分子醇和尿素的过氧化物。HRP的底物有多种，在ELISA试剂盒中常用的有：邻苯二胺（orthophenylenediamine，OPD），四甲基联苯胺（3，3，5，5-tetramethyl-benzidine，TMB）和2，2，-连氮基-双-3-乙基苯噻唑啉磺酸盐[2，2，-azino-bisc（3-ethyl-benzthiazolinesulfonate-6），ABTS]。三者各有优缺点：OPD是在ELISA中应用最多的底物，灵敏度高，比色方便，ELISA试剂盒价格但配成溶液后稳定性差，且有致异变性；TMB经酶作用后由五色变蓝色，加酸终止反应后显黄色，目测对比鲜明，可比色定量，溶液的稳定性也较差，但无致异变性，因此应用日见增多；ABTS虽然灵敏度不如OPD和TMB，但空白值很低。