该试剂盒以 HRP标记的链霉亲和素复合物（HRP Streptavidin Conjugate，HRP-SA）为基础，可用于检测细胞、组织B细胞淋巴瘤因子2（Bcl-2）、特异性强、定性定位 、背景清晰。在所用的B细胞淋巴瘤因子2（Bcl-2）一抗与相应靶抗原。该试剂盒用生物化二抗与一抗特异性，最后加 HRP-SA，形成抗原—特异一抗—生物素化二抗—HRP-SA复合物，显微镜下观察成像。

试剂盒所含试剂：

试剂A 通透液：0.1% Triton-X 100 10 mL（选用）

试剂B 2瓶封闭

试剂C （原装进口分装）已稀释的即用型bcl-2一抗（2.5ml）

试剂D （原装进口分装）生物素化 IgG 1支

（浓度1.5 mg/mL，稀释犬B细胞淋巴瘤因子2（Bcl-2） elisa试剂盒1:300~1:500）50 μL+抗体稀释液20ml

（封闭用） 10ml/瓶

试剂E HRP-SA复合物1支（浓度1 μM，稀释 1:50~1:200）100 μL 试剂F DAB显色液 5ml

用户自备试剂：

加蒸馏 800mL，浓盐酸调pH值至7.2~7.4，最后定容至1000mL

TBS-T：TBS+Tween 20（0.05%体积 ）

2．抗原修复液（依检测抗原不同而选择不同的修复液） 10mM pH6.0 柠檬酸柠檬酸0.38g 柠檬酸三钠2.45g 加蒸馏 900mL，浓盐酸调pH值至6.0，最后定容至1000mL 或：0.5M EDTA修复液（pH8.0） EDTA·2H2O 186.1g 柠檬酸三钠2.45g 加蒸馏 700mL，用10mM NaOH调pH值至8.0，最后定容至1000Ml

3. 10 mL

4. Tween 20 5 mL

石蜡包埋组织切片

实验步骤（建议方案）：

石蜡包埋组织切片3~4μm 厚度

1.烤片： 将待做切片

，于60℃恒温烤箱中至少烤1 hr；

3次（即二甲苯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ），每次

2.脱蜡： 切片放

10 min；

3. 切片经下行酒精 ，无乙醇2 min；75%乙醇2min，自来5min，95%乙醇2次（每次2min），85%，ddH2O洗2×2min；

4.抗原修复：犬B细胞淋巴瘤因子2（Bcl-2） ELISA试剂盒 根据抗体说明书推荐方法进行抗原修复，常采用高压、微波（温度达到98~100℃）或酶消化修复法，室温自然 自来2min，TBS洗涤（2×2min）

5.封闭： 滴加试剂B，37℃湿盒孵育30 min，ddH2O洗2×1）* 注：有些抗原勿需修复，直接进

6.加一抗：滴加用试剂C（即用型一抗），37℃湿盒孵育2 hr 或4℃过夜；

7.洗涤： TBS-T洗涤（3×5 min）；

8.封闭： 滴加试剂B，37℃湿盒孵育10 min；

9.加二抗： 滴加用抗体稀释液稀释的生物素化二抗（试剂D），37℃湿盒中孵育30 min；

10.洗涤： TBS-T洗涤（3×5 min）；

11.封闭： 滴加试剂Tween 20，37℃湿盒孵育封闭20 min；

12.加HRP-SA： 滴加用试剂C稀释的试剂E（1：50~200，终浓度5~20 nM），37℃湿盒中孵育30 min；

13.洗涤： TBS-T洗涤（3×5 min），TBS洗涤（2×5 min）；

14.显色：应用DAB溶液（试剂F）显色；

15.复染：自来，复染，脱 ，透明；

16.封片： 待组织标本干后，用试剂

17.观察成像： 显微镜下观察成像封片；