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抗中性粒细胞胞浆抗体（ANCA）测定

血管炎系指以血管壁（主要是动脉）发炎和坏死为基本病理所引起的一组疾病。

近年来认识到抗中性粒细胞胞浆抗体（anti-neutrophil cytoplasmic antibody，ANCA）是存在于血管炎患者血清中的自身抗体，是诊断血管炎的一种特异性指标。采用间接免疫荧光法（1f了），可将ANCA分为胞浆型（C-ANCA）、核周型（P-ANCA）和不典型ANCA（X-ANCA）。

C—ANCA的靶抗原是髓过氧化物酶（myeloperoxidase，MPO）、弹性蛋白酶（elastase）、组织蛋白酶C（cathepsin G）、溶菌酶、乳肝褐素（1actoferrin），在所有ANCA阳性血清中约占40％。X-AN-CA或P-ANCA的靶抗原是乳肝褐素、溶菌酶、β葡萄糖苷酸酶（β-glucoronidase）、组织蛋白酶G。

ANCA的检测方法有许多种，包括IFF、RIA、ELISA、Western印迹法、斑点印迹法及免疫沉淀试验等。首选方法为IFF，至今仍作为ANCA筛检的“金指标”。在用IFF法检测ACNA的同时进行ELISA的检测将有助于疾病的动态观察；靶抗原PR3或MPO的分辨将有助于某些特发性坏死性血管炎或坏死性肾小球肾炎的确诊。Gross等（1993）作了ANCA和有关疾病的分析。陈素英等（1996）以IFF法检测ANCA并对其与170例疾病的相关性作了报道。现介绍IFF检测ANCA。

1．操作步骤

（1）用肝素抗凝血分离白细胞，以0．01mol／L，pH7．4PBS液洗涤，制成细胞基质片，用95％乙醇固定5min。

（2）将1：20稀释的血清标本滴加于底物片上，湿盒内37~C孵育30min。

（3）再将基质片分为三组，分别滴加1：10稀释的FITC-羊抗人IgG、IgA和IgM，37~C孵育30min，洗涤3次。

（4）加2：1缓冲甘油封片，置荧光显微镜下观察。

2．结果观察 C-ANCA：荧光将胞浆勾划出清晰分叶核轮廓；P-ANCA：荧光集中核周围形成环状，或不规则块状；X-ANCA：表现为弥漫的胞浆荧光。

3．注意事项由于乙醇固定的基质片上抗核抗体（ANA）阳性血清易表现为P-ANCA假阳性，因此应采用多聚甲醛固定以分辨是否ANA与ANCA共存。

4．临床意义 C-ANCA是诊断多发性肉芽肿（Weaner’s granulomatosis，WG）非常敏感的指标，也少见于微小多动脉炎（microscopic polyarteritis，MPA），Churg-Strauss综合征、经典的结节性多发性动脉炎。P-ANCA见于肾性血管炎，急性进行性肾小球肾炎（rapidly pro-Gressive lomemlonephritis，PRGN），风湿性和胶原性血管疾病。X-ANCA或P-ANCA见于溃疡性结肠炎，自身免疫性肝炎，原发性硬化胆管炎。

陈素英等检测的结果指出，ANCA在风湿病患者血清中阳性率为70．0％，与ANA和抗组蛋白（histone）有交叉重叠现象。在风湿病患者中，ANCA不仅存在于SLE中，类风湿性关节炎及皮肌炎患者的血清也可出现ANCA阳性。在肾脏疾病中，ANCA阳性率为72．85％，其分布较广泛，多见于新月体肾小球肾炎、紫癜性肾炎、IsA肾病和局灶节段性肾小球硬化，但也可见于微小病变性肾病、急性间质肾炎、肾小球终末期病变等疾病中。

因此，不能以ANCA阳性而确诊为局限于肾脏MPA或坏死性肾小球肾炎，肾组织学检查仍不可缺少。