正确选择流式抗体及搭配荧光素

第一、选择流式抗体要看清楚抗的是你的目标蛋白质，目标蛋白的物种不要搞错了，有些抗体对好几个物种的目标蛋白有反应，重要的是对你的实验有没有影响。
第二、抗体的物种是小鼠,大鼠,兔子还是什么。以备不时之需，最好还是选择你有匹配二抗。如果抗体还能够做荧光染色啊，western blot啊用途多了更好。
第三、选择流式抗体还要看荧光的颜色的选择：一是你的流式仪一定要能读，二是跟你需要counterstain的其他流式抗体错开频率。
第四、抗体的球蛋白亚型。因为要根据这个选择isotype对照用抗体。每个抗体分子携带的荧光分子数量也要一样才行。最好是一个isotype你的好几个抗体都能用，就省了事了。
第五、到底能测试多少样品。有些产品介绍没说清楚，可以根据推荐的浓度计算一下。一是这样才看出价格高低，二是根据自己需要选择大支还是小支.买多了过期也是浪费。
另外，选择流式抗体时还可以看制作抗体所用的抗原是什么，有的是肿瘤组织提取液，有的是重组蛋白，有的是肽链片断。选用哪个跟你的实验用途有关。有些蛋白质有很多亚型，也要注意是否测试过跟那些亚型起反应。
流式抗体搭配流式荧光素主要有2个原则：
第一，每个通道只能选择1种荧光素。
第二，各个通道之间的荧光素可以随意搭配，因此需要注意：
1、流式抗体每个通道只能选择1种荧光素。以Calibur为例说明，Calibur的FL1通道选择了Alexa Fluro488就不能选FITC ，或者选择了FITC就不能选择AlexaFluro488。Calibur的FL3通道尽管能检测PE-Texas Red, PE-Cy5, PerCP, PerCP-Cy5.5, PE-Cy7五个荧光素，但是我们搭配的时候只能选择其中1个。
2、各个通道之间的荧光素可以随意搭配：如果客户的流式细胞仪能做4个通道，在第1个原则之下，那么每个通道随便选出1个荧光素就可以组合成4个颜色。以2跟激光的Calibur为例，Calibur各个荧光素之间可以搭配出16种组合。比如常用的搭配是F I T C（ F L 1 ）＋P E（F L 2）＋PerCP（FL3）+APC（FL4）, 这个搭配组合可以更改成Alex Fluro（FL1）＋PE（FL2）＋PerCP（FL3）+APC（FL4）, 或者FITC（FL1）＋PE（FL2）＋PerCP（FL3）+Alex Fluro（FL4），或者FITC（FL1）＋PE（FL2）＋PE-Cy5（FL3）+APC（FL4）等等。总之，在第1原则之下，我们可以随意搭配和组合各个荧光素。但是需要注意的是，APC和PE-Cy5一起使用的话，上流式以后，容易导致补偿过度。