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BL21(DE3)pLysS感受态细胞
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详细内容
本公司生产的BL21(DE3)pLysS感受态细胞是采用BL21(DE3)pLysS菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞,可用于DNA的化学转化。使用pUC19质粒检测,转化效率可达107,⁻⁷0℃保存6个月转化效率不发生改变。
| 产品名称 | 英文名称 | 规格 |
| BL21(DE3)pLysS感受态细胞 | BL21(DE3)pLysS Competent Cells | 10×100μl|20×100μl |

基因型:F-,ompT,hsdSB(rB-mB-),dcm,gal(DE3),pLysS,Cmr
特点:该菌株带有质粒pLysS,因此具有氯霉素抗性。质粒pLysS含有表达T7溶菌酶的基因,能够降低目的基因的背景表达水平,但不干扰目的蛋白的表达。该菌适合表达毒性蛋白和非毒性蛋白。
储存条件:⁻⁷0℃保存,必须加干冰运输。自收货之日起液氮保存至少一年,⁻⁷0℃保存至少6个月。
月桂烯(香叶烯)质量规格:HPLC≥80%,标准品Myrcene ELISAKitSRB/CD36人清道夫受体B规格:48T/96T 大鼠白介素2可溶性受体α链(sIL-2Rα/CD25)试剂盒 Rat soluble ierleukin-2 receptor,sIL-2Rα ELISA kit
原儿茶醛,3,4-二羟基苯质量规格:≥98%3,4-Dihydroxybenzaldehyde 小鼠白介素12A(IL12A)ELISA试剂盒 ,英文名: IL12A ELISA Kit CLIAKitfoGmouseELISAKit小鼠甘油三酯规格:48T/96T
原儿茶醛(标准品)质量规格:HPLC≥98%,标准品3,4-Dihydroxybenzaldehyde 人C型尿肽(CNP)ELISA检测试剂盒HumanC-typenaiureticpeptide,CNPELISAKit 96T/48T 人体BRCA-2RFLP基因分析试剂盒20
甲砜霉素甘氨酸酯盐酸盐质量规格:>98%,BRThiamphenicol glycinate HCl 大鼠睫状神经营养因子(CF)试剂盒 Rat Ciliary Neuroophic Factor,CF ELISA Kit ELISAKitai-CMVIgM人抗巨细胞病毒抗体IgM规格:48T/96T
犬5羟色胺(5-HT)ELISA检测试剂盒Canine5-Hydroxyyptamine,5HTELISAKit 96T/48T 65604-80-0麦冬皂苷D'品牌 ophiopogonin D'
犬水通道蛋白5(AQP5)试剂盒 Dog aquaporin-5,AQP5 ELISA kit 57-87-4甾醇规格 Ergosterol
英文名称HumanLBPELISAKit人脂多糖结合蛋白(LBP)规格:96T/48T 479-91-4蔓荆子黄素厂家 Vitexicarpin
超氧化物歧化酶(SOD)组织裂解样品制备试剂盒50 88105-29⁻⁷三七皂苷Fe说明书 Notoginsenoside Fe
RatHeatShockFactor1,HSF1ELISA试剂盒大鼠热休克因子1(HSF1)ELISA试剂盒规格:96T/48T 冬青素A品牌 Ilexgenin A
BL21(DE3)pLysS感受态细胞520-36-5芹菜素品牌 Apigenin 植物组织线粒体形态/活性荧光染色试剂盒20
520-34-3香叶木素说明书 Diosmetin 植物组织线粒体超氧化物歧化酶(Mn/FeSOD)分离试剂盒50
520-33-2橙皮素厂家 Hesperitin 植物组织膜性囊泡(vacuole)分离试剂盒20
520-27-4地奥司明说明书 Diosimin 植物组织可溶性总蛋白制备试剂盒20
520-26-3橙皮苷规格 Hesperidin 植物组织DNA损伤彗星荧光检测试剂盒20
产品仅用于科研操作程序:
注意:重要的是及时固定,并在固定液中加入0.1%的DEPC处理,以抑制RNA酶对mRNA的分解作用。此外,过度固定对原位杂交有明显的不利影响。
1.玻片的处理:一般采用多聚赖氨酸或APES。切片厚度10-20μm。
2.细胞在多聚赖氨酸处理的盖玻片上进行培养,条件为37℃和5%的CO2,所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。
3.培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定:固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2⁻⁷.6),含有1/1000 DEPC。室温固定 20--30分钟。蒸馏水充分洗涤,干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。
4.30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合,室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。
5.暴露mRNA核酸片段:切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶,混匀),37℃或室温消化5—120钟。有时也可以不消化。原位杂交用 PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
6.后固定:胃蛋白酶消化后才需要。固定液为1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2⁻⁷.6),含有1/1000 DEPC。室温固定 10分钟。蒸馏水洗涤3次。
7.预杂交:湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体,不洗。
8.杂交——按每张切片20μι杂交液,加在切片上。将原位杂交用盖玻片的保护膜揭开后,盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
9.杂交后洗涤:揭掉盖玻片,37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次;37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色,重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。
10.滴加封闭液:37℃30分钟。甩去多余液体,不洗
11.滴加生物素化鼠抗*:37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
12.滴加SABC:37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
13.滴加生物素化过氧化物酶:37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。
14.DAB显色:使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂A,B,C各一滴,混匀,加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。
15.必要时苏木素复染,充分水洗。
16.酒精脱水,二甲苯透明,封片。
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