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pCold-SUMO原核蛋白表达试剂盒
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详细内容
本系统是包涵体蛋白的佳解决方法,提高蛋白的可溶性优化表达。试剂盒中的原核表达载体pCold-SUMO的启动子(CS Promoter)来源于南嗜冷细菌,在低温下(15℃)才能启动蛋白的表达。低温下细菌生长缓慢,使得蛋白合成速度减慢,从而大限度的提高了蛋白正确折叠的几率,提高了蛋白可溶性表达,增强了活性蛋白的表达比率。该表达系统所包含的SUMO-tag可以大地提高小分子量蛋白的表达量,而且能进一步提高蛋白的可溶表达几率。另外,TEE信号肽可增强冷启动子调控下目的蛋白的高表达。
| 产品名称 | 英文名称 | 规格 |
| pCold-SUMO原核蛋白表达试剂盒 | pCold-SUMO expression system | 1盒 |

本试剂盒中的pCold-SUMO载体含有10个组氨酸标签(10*His-tag),具有较强的Ni-NTA结合能力,提高了粗蛋白样品中目标蛋白的捕获能力,从而提高纯化产量。在蛋白纯化过程中可以使用更高浓度的咪唑进行漂洗,去杂蛋白的能力明显提升。从而获得更高纯度的重组蛋白。在重组蛋白酶切去除SUMO标签后,利用Ni-NTA去除SUMO标签更为彻底,获得纯度更高的无标签目标蛋白。
产品特点:
冷启动子,低温诱导表达,大限度地提高蛋白地可溶性。
分子伴侣可协助蛋白的正确折叠。
可大大的提高蛋白表达量。
两种宿主菌和两种蛋白酶可选,使实验方案更加灵活。
原B2(标准品)质量规格:HPLC≥98%,标准品Procyanidin B2 鱼类三甲状腺原氨酸(T3)ELISA检测试剂盒Fishi-iodothyronine,T3ELISAKit 96T/48T HumanGranulocyte-MacrophageColonyStimulatingFactor,GM-CSFELISA试剂盒人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)ELISA试剂盒规格:96T/48T
原人参二醇(标准品)质量规格:HPLC≥98%,标准品Proanaxdiol 人1,3-二1酸甘油酸(1,3-DPG)试剂盒 Human 1,3-Disphosphoglycerate,1,3-DPG ELISA Kit HumanLaminin,LNELISAKit人层连蛋白/板层素(LN)ELISA试剂盒规格:96T/48T
原人参三醇(标准品)质量规格:HPLC≥98%,标准品Proanaxatriol 英文名称MouseCCL22ELISAKit小鼠CCL22规格:96T/48T 大鼠载脂蛋白B100(Apo B100)ELISA试剂盒 ,英文名: Apo B100 ELISA Kit
愈创甘油(标准品)质量规格:含量测定Guaifenesin 冰冻切片组织衰老特异性早期脂褐素苏丹原位染色试剂盒50 人低密度脂蛋白复合物(LDL-IC)ELISA检测试剂盒HumanLDL-ICELISAKit 96T/48T
犬神经型合成酶(nNOS)试剂盒 Canine Neuronal Niic Oxide Syhase,nNOS ELISA Kit 524-12-9蟛蜞菊内酯说明书 Wedelolactone
英文名称HumanProgesteroneELISAkit人孕激素(Progesterone)规格:96T/48T 20977-05-3七叶皂苷钠品牌 Escin mono salt
虫卵细胞活力和死亡体外裂卵(invioexcystation)定量检测试剂盒20 80321-69-3七叶胆苷XVII规格 Gypenoside XVII
Ratheatshockprotein,HSP47ELISA试剂盒大鼠热休克蛋白47(HSP47)ELISA试剂盒规格:96T/48T 33457-62-4桤木酮厂家 Alnustone
小鼠中性粒细胞激活蛋白3(NAP3)ELISA试剂盒 ,英文名: NAP3 ELISA Kit 2643-85-8水合氧化胡素说明书 Oxypeucedanin hydrate
pCold-SUMO原核蛋白表达试剂盒487-41-2连翘苷厂家 Phillyrin 植物维生素D(VD)ELISA检测试剂盒PlaVitaminD,VDELISAKit 96T/48T
4871-97-0莪术醇说明书 Curcumol 植物维生素C(VC)ELISA检测试剂盒PlaHumanVitaminC,VCELISAKit 96T/48T
486-90-8黄华碱说明书 Thermopsine 植物维生素B6(VB6)ELISA检测试剂盒PlaVitaminB6,VB6ELISAKit 96T/48T
486-86-2N-甲基野靛碱厂家 N-Methylcytisine 植物维生素B12(VB12)ELISA检测试剂盒PlaVitaminB12,VB12ELISAKit 96T/48T
486-66-8大豆苷元规格 Daidzein 植物维生素A(VA)ELISA检测试剂盒PlaVitaminA,VAELISAKit 96T/48T
产品仅用于科研操作程序:
注意:重要的是及时固定,并在固定液中加入0.1%的DEPC处理,以抑制RNA酶对mRNA的分解作用。此外,过度固定对原位杂交有明显的不利影响。
1.玻片的处理:一般采用多聚赖氨酸或APES。切片厚度10-20μm。
2.细胞在多聚赖氨酸处理的盖玻片上进行培养,条件为37℃和5%的CO2,所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。
3.培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定:固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2⁻⁷.6),含有1/1000 DEPC。室温固定 20--30分钟。蒸馏水充分洗涤,干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。
4.30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合,室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。
5.暴露mRNA核酸片段:切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶,混匀),37℃或室温消化5—120钟。有时也可以不消化。原位杂交用 PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
6.后固定:胃蛋白酶消化后才需要。固定液为1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2⁻⁷.6),含有1/1000 DEPC。室温固定 10分钟。蒸馏水洗涤3次。
7.预杂交:湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体,不洗。
8.杂交——按每张切片20μι杂交液,加在切片上。将原位杂交用盖玻片的保护膜揭开后,盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
9.杂交后洗涤:揭掉盖玻片,37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次;37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色,重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。
10.滴加封闭液:37℃30分钟。甩去多余液体,不洗
11.滴加生物素化鼠抗*:37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
12.滴加SABC:37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
13.滴加生物素化过氧化物酶:37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。
14.DAB显色:使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂A,B,C各一滴,混匀,加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。
15.必要时苏木素复染,充分水洗。
16.酒精脱水,二甲苯透明,封片。
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