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XL2-Blue化学感受态细胞
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详细内容
XL2-Blue菌株来源于XL1-Blue菌株,为Hte(high transformation efficiency)基因型,Hte是特异性提高感受态转化效率及大质粒转化能力的宿主菌基因型,已成功应用于40kd质粒的构建。
| 产品名称 | 英文名称 | 规格 |
| XL2-Blue化学感受态细胞 | XL2-Blue Chemically Competent Cell | 10×100μl|50×100μl |

Hte使得XL2-Blue适用于大质粒DNA和重组产物的转化,降低片段大小的偏爱性,多用于文库构建。
recA1和endA1的突变有利于插入DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取。
hsdSMR突变导致EcoK核酸内切酶系统缺失,增强了外源DNA的稳定性和提取质量。lacZΔM15的存在使XL2-Blue菌株可用于蓝、白斑筛选。此菌株具有四环素和氯霉素抗性。
XL2-Blue感受态细胞经特殊工艺制作,经pUC19质粒检测转化效率>1×109cfu/μg。
保存条件:-80℃
基因型:
TetRΔ(mcrA)183 Hte[F′{proAB lacIq lacZM15Tn10(TetR)AmyCamR}](mcrCB-hsdSMR-mrr)173 endA1 supE44thi-1 recA1 gyrA96 relA1
操作说明:
1.XL2-Blue感受态细胞放置冰中融化(或放手心或室温片刻,待菌体处于冰水混合状态时迅速插入冰中),加入目的DNA(质粒或连接产物)并用手拨打EP管底轻轻混匀,冰上静置25分钟。
2.42℃水浴热激45,迅速放回冰上并静置2分钟,晃动会降低转化效率。
3.向离心管中加入700μl不含抗生素的无菌培养基(2YT或LB),混匀后37℃,200 rpm复苏60分钟。
4.5000rpm离心一分钟收菌,留取100μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。
5.将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。如果进行蓝白斑筛选操作,将平板放37℃培养至少14h。
注意事项:
1.感受态细胞好在冰上融化。
2.混入质粒或连接产物时应轻柔操作。
3.转化高浓度的质粒或高效率的连接产物可相应减少终用于涂板的菌量。
仲辛醇(Standard for GC,≥99.5%(GC))2-Octanol质量规格:Standard for GC,≥99.5%(GC) 人抗型肝炎病毒抗体(ai-HCV)试剂盒 Human ai-hepatitis C virus(HCV)aibody ELISA Kit 人血管紧张素Ⅱ转化酶(ACEⅡ)ELISA试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
二十八烷(standard for GC,≥98.5%(GC))Octacosane质量规格:standard for GC,≥98.5%(GC) rabbitTissuefactor,TFELISAKit兔子组织因子(TF)ELISA试剂盒规格:96T/48T 猪神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)试剂盒 Pig glial fibrillary acidic protein,GFAP ELISA Kit
草酸(Standard for GC,≥99.6%)Oxalic acid dihydrate质量规格:Standard for GC,≥99.6% 载玻片细胞CYP1A2蛋白表达NBT显色光学显微镜检测试剂盒10/20 HumanN-terminalprocollagenⅢpropeptide,PⅢNPELISAKit 人Ⅲ型胶原肽(PⅢNP)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装
正十五烷(标准品)N-PENTADECANE质量规格:内标 Humanβcatenin,β-CatELISA试剂盒人β连环蛋白/联蛋白(β-Cat)ELISA试剂盒规格:96T/48T HumanmammarycarcinomaMarker-CA153ELISA试剂盒人癌标志物-CA153ELISA试剂盒规格:96T/48T
猫细小病毒抗体(FPV)ELISA检测试剂盒Felisparvovirus,FPVELISAKit 96T/48T 539-86-6大蒜素品牌 Allicin
犬血清淀粉样蛋白A2(SAA2)试剂盒 Canine serum amyloid A2,SAA2 ELISA Kit 55481-88-4大叶茜草素规格 Rubimaillin
英文名称MouseAILR3ELISAKIT小鼠AILR3规格:96T/48T 122021⁻⁷4-3丹参酚酸B甲酯厂家 Monomethyl lithospermate B
肠胃活检螺旋杆菌(H.PYLORI)吉姆萨(GIEMSA)染色试剂盒50 22681⁻⁷2⁻⁷丹参素说明书 Danshensu
RatGATAbindingprotein4,GATA4ELISA试剂盒大鼠GATA结合蛋白4(GATA4)ELISA试剂盒规格:96T/48T 67920-52-9丹参素钠品牌 Danshensu
XL2-Blue化学感受态细胞74285-86-2雷酚内酯品牌 Triphenolide 组织1酸二酯酶2(PDE2)活性荧光定量检测试剂盒10
74285-86-2雷酚内酯品牌 Triphenolide 组织1酸二酯酶2(PDE2)活性酶连续循环光谱法定量检测试剂盒10
73-31-4褪黑素说明书 Melatonin 组织1酸二酯酶1(PDE1)活性荧光定量检测试剂盒10
73069-14-4白术内酯Ⅱ品牌 2-Atractylenolide 组化染色操作20样本
73-03-0虫草素说明书 cordycepin 组分氧化应激活性氧(ROS)鲁米诺化学发光法定量检测试剂盒50
产品仅用于科研操作程序:
注意:重要的是及时固定,并在固定液中加入0.1%的DEPC处理,以抑制RNA酶对mRNA的分解作用。此外,过度固定对原位杂交有明显的不利影响。
1.玻片的处理:一般采用多聚赖氨酸或APES。切片厚度10-20μm。
2.细胞在多聚赖氨酸处理的盖玻片上进行培养,条件为37℃和5%的CO2,所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。
3.培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定:固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2⁻⁷.6),含有1/1000 DEPC。室温固定 20--30分钟。蒸馏水充分洗涤,干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。
4.30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合,室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。
5.暴露mRNA核酸片段:切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶,混匀),37℃或室温消化5—120钟。有时也可以不消化。原位杂交用 PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
6.后固定:胃蛋白酶消化后才需要。固定液为1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2⁻⁷.6),含有1/1000 DEPC。室温固定 10分钟。蒸馏水洗涤3次。
7.预杂交:湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体,不洗。
8.杂交——按每张切片20μι杂交液,加在切片上。将原位杂交用盖玻片的保护膜揭开后,盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
9.杂交后洗涤:揭掉盖玻片,37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次;37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色,重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。
10.滴加封闭液:37℃30分钟。甩去多余液体,不洗
11.滴加生物素化鼠抗*:37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
12.滴加SABC:37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
13.滴加生物素化过氧化物酶:37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。
14.DAB显色:使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂A,B,C各一滴,混匀,加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。
15.必要时苏木素复染,充分水洗。
16.酒精脱水,二甲苯透明,封片。
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