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TA克隆试剂盒(不含多克隆位点)(拓扑连接酶技术)
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详细内容
本试剂盒和传统的T4连接酶原理不同,它根据用拓扑异构酶可以在瞬间(几钟-几分钟)、高效(接近100%)连接DNA片段的原理,采用本公司独特的工艺制成。
| 产品名称 | 英文名称 | 规格 |
| TA克隆试剂盒(不含多克隆位点)(拓扑连接酶技术) | Zero Background TOPO TA Cloning Kit(without MCS) | 20次|80次 |

试剂盒组份(20次):
TOPO-Ta Simple Vector(30ng/μl)—————20μl
1000bp Control(30ng/μl)————5μl
10×Enhancer———————————20μl
产品特点:
1.可以在瞬间(几钟-几分钟)完成连接。
2.无需冰浴和热休克,室温5分钟内完成转化;无需1小时复苏,只需37℃10分钟复苏便可以涂板。从连接到涂板只需15-20分钟。
3.无自连、零背景,无需繁琐蓝白斑筛选,见到长出的克隆便是有插入的(接近100%)。
4.可以连接长达10kb片段(即使连接5kb片段,挑10个菌落,至少8个是有插入的),是目上简单、快速、零背景免筛选的TOPO TA克隆载体。
储存条件:-20℃,有效期12个月。
本制品别名:TA克隆载体连接试剂盒
组蛋白去乙酰化酶抑制剂(M 344)质量规格:>98%,HDAC抑制剂M344 英文名称MousePPAR-γELISAKit小鼠过氧化物酶体增殖因子活化受体γ(PPAR-γ)规格:96T/48T 大鼠雄(ASD)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
2-硝基咪唑 质量规格:>98%,原装进口2-Nitroimidazole 冰冻切片碱性1酸酶活性染色试剂盒50 人细胞毒性T细胞相关抗原4(CTLA-4/CD152)试剂盒 Human CTLA-4 ELISA Kit
4-(三氟甲基)-1H-咪唑 质量规格:>98%4-(Trifluoromethyl)-1H-imidazole RatannexinⅤ,ANX-ⅤELISA试剂盒大鼠膜联蛋白Ⅴ(ANX-Ⅴ)ELISA试剂盒规格:96T/48T 谷酸(Glu)含量测试盒 可见分光光度法 50管/48样
2-甲基-4-三氟甲基咪唑 质量规格:>97%2-Methyl-4-trifluoromethylimidazole 小鼠IgE-Fc片段受体Ⅱ(FcεRⅡ)ELISA试剂盒 ,英文名: FcεRⅡ ELISA Kit Ratp53/tumorprotein,p53/TP53ELISA试剂盒大鼠P53(P53)ELISA试剂盒规格:96T/48T
稀酰胺1公斤 81907-61-1灵芝酸B说明书 Ganoderic acid B
RatFibrinogen,FbgELISA试剂盒大鼠血纤蛋白原(Fbg)ELISA试剂盒规格:96T/48T 38412-46-3芦荟宁品牌 Aloenin
小鼠组织多肽抗原(TPA)ELISA试剂盒 ,英文名: TPA ELISA Kit 5610-40-2一叶萩碱规格 Securinine
小鼠心肌肌钙蛋白Ⅰ(cTn-Ⅰ)ELISA检测试剂盒MousecardiacoponinⅠ,cTn-ⅠELISAKit 96T/48T 511-96-6支脱皂苷元厂家 Gitogenin
人抗促甲状腺素受体抗体(Ab)试剂盒 human thyroid stimulating hormone receptor aidoby,Ab ELISA Kit 16562-13-3左旋千金藤啶碱说明书 L-Stepholidine
TA克隆试剂盒(不含多克隆位点)(拓扑连接酶技术)冬青苷O规格 Ilexgenin O 组织镁离子浓度化学比色法定量检测试剂盒20
大花双参苷A规格 Triplostoside A 组织酶3(PON3)活性荧光定量检测试剂盒
乌头原碱规格 Hypaconine 组织酶2(PON2)活性比色法定量检测试剂盒
柴胡皂苷B说明书 Saikosaponin B 组织氯霉素乙酰基转移酶(CAT)报告基因活性荧光定量检测试剂盒20
柴胡皂苷B品牌 Saikosaponin B 组织氯霉素乙酰基转移酶(CAT)报告基因活性荧光薄层色谱(TLC)检测试剂盒20
产品仅用于科研操作程序:
注意:重要的是及时固定,并在固定液中加入0.1%的DEPC处理,以抑制RNA酶对mRNA的分解作用。此外,过度固定对原位杂交有明显的不利影响。
1.玻片的处理:一般采用多聚赖氨酸或APES。切片厚度10-20μm。
2.细胞在多聚赖氨酸处理的盖玻片上进行培养,条件为37℃和5%的CO2,所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。
3.培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定:固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2⁻⁷.6),含有1/1000 DEPC。室温固定 20--30分钟。蒸馏水充分洗涤,干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。
4.30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合,室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。
5.暴露mRNA核酸片段:切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶,混匀),37℃或室温消化5—120钟。有时也可以不消化。原位杂交用 PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
6.后固定:胃蛋白酶消化后才需要。固定液为1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2⁻⁷.6),含有1/1000 DEPC。室温固定 10分钟。蒸馏水洗涤3次。
7.预杂交:湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体,不洗。
8.杂交——按每张切片20μι杂交液,加在切片上。将原位杂交用盖玻片的保护膜揭开后,盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
9.杂交后洗涤:揭掉盖玻片,37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次;37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色,重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。
10.滴加封闭液:37℃30分钟。甩去多余液体,不洗
11.滴加生物素化鼠抗*:37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
12.滴加SABC:37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
13.滴加生物素化过氧化物酶:37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。
14.DAB显色:使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂A,B,C各一滴,混匀,加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。
15.必要时苏木素复染,充分水洗。
16.酒精脱水,二甲苯透明,封片。
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