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CHO-K1-GFP-Puro稳转株
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品牌名称：$brandModel.Title型号： 原产地：中国大陆 更新时间：2026/10/16 11:04:28
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详细内容
CHO-K1-GFP-Puro稳转株
产品名称 | CHO-K1-GFP-Puro 稳转株 |
产品货号 | XY-O1100 |
中文名称 | GFP标记的CHO-K1 稳转株 |
Lot number | CHO-K1-10A1P |
细胞规格 | 复苏细胞 (T25细胞瓶) 或1 × 106 细胞冻存细胞 |
细胞形态 | 上皮细胞样 |
生长特性 | 贴壁生长 |
细胞株 构建流程 | （1）构建目的基因过表达慢病毒重组质粒，并包装慢病毒； （2）慢病毒以合适的MOI值转导靶细胞； （3）用最佳浓度药物对细胞株进行筛选，获得混合稳转株； （4）稳转株质检（COA）。 |
完全培养基 | F-12K + 10% FBS + 1% P/S（选择添加） |
培养条件 | (1) 气相：95%空气，5% CO2；(2) 温度：37 ℃。 |
细胞冻存 | 无血清冻存液 |
存储条件 | 液氮 |
1. 基本概念
CHO-K1 细胞：中国仓鼠卵巢细胞（Chinese Hamster Ovary Cells）的一株常用亚型，因易于培养、外源基因表达效率高且适合大规模工业化生产，被广泛应用于重组蛋白、单克隆抗体等生物药的研发与生产。
GFP 标记：绿色荧光蛋白（Green Fluorescent Protein, GFP）作为报告基因，通过基因工程手段整合到细胞基因组中，可通过荧光显微镜或流式细胞术（FACS）直观监测细胞状态、定位或筛选阳性克隆。
Puro 抗性：嘌呤霉素（Puromycin, Puro）是一种抗生素，可通过基因工程赋予细胞抗性（如表达 Puro 抗性基因），用于稳转株筛选 —— 仅成功整合目标基因的细胞可在含 Puro 的培养基中存活。
2. 构建流程
载体构建：
将 GFP 基因和 Puro 抗性基因克隆至表达载体（如质粒），通常与目标基因（如需表达的蛋白编码基因）共表达，或直接构建为 GFP 单标记载体。
转染：
通过脂质体转染、电穿孔等方法将载体导入 CHO-K1 细胞。
筛选与克隆化：
加入 Puro 抗生素，未成功整合载体的细胞死亡，存活细胞为初步筛选的稳转株。
通过有限稀释法或单细胞分选（如流式细胞术）获得单细胞克隆，确保单克隆源性及 GFP 表达均一性。
鉴定与扩增：
荧光显微镜观察 GFP 表达强度及定位，Western blot 验证蛋白表达，PCR 确认基因整合。
扩大培养并冻存，建立稳定细胞库。
3. 应用场景
蛋白表达与分析：
GFP 作为标签，用于追踪目标蛋白的亚细胞定位、表达动态或共定位研究（如与其他荧光标记蛋白联用）。
细胞示踪与分选：
流式细胞术（FACS）可快速分选出高表达 GFP 的细胞亚群，用于纯度优化或功能研究。
药物筛选与毒性评估：
通过 GFP 荧光强度变化监测细胞活性（如药物处理后凋亡或增殖状态），或用于高通量筛选系统。
生物工艺开发：
利用 CHO-K1 细胞的工业化生产优势，结合 GFP/Puro 系统优化重组蛋白的稳定表达株，提升产率与一致性。
仅用于科研，不能用于临床诊断！所有产品仅供科研使用，不得用于人或动物的治疗等任何其他用途，不为任何个人提供产品和服务。
以实际收货产品说明书为准，网站说明书仅供参考。
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