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HMrSV5-GFP-Puro稳转株
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品牌名称：$brandModel.Title型号： 原产地：中国大陆 更新时间：2026/10/15 11:08:30
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详细内容
HMrSV5-GFP-Puro稳转株
英文名称 | HMrSV5-GFP-Puro polyclonal stable cell line |
产品货号 | XY-O1102 |
中文名称 | GFP 标记的 HMrSV5 稳转株 |
Lot number | HMrSV5-10A1P |
细胞规格 | 复苏细胞 (T25细胞瓶) 或1 × 106 细胞冻存细胞 |
细胞形态 | 上皮细胞样 |
生长特性 | 贴壁生长 |
细胞株 构建流程 | （1）构建目的基因过表达慢病毒重组质粒，并包装慢病毒； （2）慢病毒以合适的MOI值转导靶细胞； （3）用最佳浓度药物对细胞株进行筛选，获得混合稳转株； （4）稳转株质检（COA）。 |
完全培养基 | RPMI-1640 + 10% FBS + 1% P/S（选择添加） |
培养条件 | (1) 气相：95%空气，5% CO2；(2) 温度：37 ℃。 |
细胞冻存 | 无血清冻存液 |
存储条件 | 液氮 |
一、基本概念
1. 关键元件解析
HMrSV5：
一种标签蛋白（Tag），来源于猴病毒 5（Simian Virus 5）的血凝素 - 神经氨酸酶蛋白（Hemagglutinin-Neuraminidase）。
作用：用于目标蛋白的特异性识别和检测（如通过抗体进行 Western Blot、免疫荧光染色等），便于追踪和纯化目标蛋白。
GFP：
绿色荧光蛋白（Green Fluorescent Protein），来源于水母，在蓝光或紫外光激发下可发出绿色荧光。
作用：作为报告基因，用于直观观察目标蛋白的表达位置和细胞内分布（如通过荧光显微镜），或筛选成功转染的细胞。
Puro：
嘌呤霉素（Puromycin）抗性基因，编码嘌呤霉素 N - 乙酰转移酶。
作用：用于稳转株的筛选 —— 在含有嘌呤霉素的培养基中，未成功整合目的基因的细胞会被杀死，而稳定表达抗性基因的细胞可存活并增殖。
2. 稳转株定义
通过基因转染技术（如病毒感染、质粒转染）将外源基因（含 HMrSV5-GFP-Puro 融合表达载体）整合到宿主细胞基因组中，使目的基因能够 稳定、持续表达 的细胞株。与瞬时转染相比，稳转株可长期保持基因表达，适用于需要长期观察或功能研究的场景。
二、构建原理与流程
1. 载体构建
构建含 HMrSV5-GFP-Puro 融合基因 的表达载体（如质粒），通常包括：
启动子（如 CMV 启动子）：驱动基因转录。
多克隆位点（MCS）：用于插入目标基因，使目标基因与 HMrSV5-GFP 形成融合蛋白。
Puro 抗性基因：用于后续筛选。
2. 转染与筛选
转染：将载体导入宿主细胞（如 HEK293、HeLa 等），常用方法包括脂质体转染、电穿孔或病毒包装（如慢病毒、逆转录病毒）。
筛选：转染后使用 嘌呤霉素培养基 进行压力筛选，存活细胞即为成功整合外源基因的单克隆稳转株。
3. 鉴定与验证
荧光检测：通过荧光显微镜观察 GFP 表达，确认细胞是否发出绿色荧光。
分子生物学检测：
Western Blot：使用抗 HMrSV5 或 GFP 的抗体检测融合蛋白表达。
测序：验证目标基因插入位置和序列正确性。
三、应用场景
1. 蛋白表达与定位研究
通过 GFP 荧光直接观察目标蛋白在细胞内的分布（如细胞质、细胞核或细胞膜），结合 HMrSV5 标签进行免疫共沉淀（Co-IP）等互作研究。
2. 细胞示踪与分选
利用 GFP 荧光标记细胞，通过流式细胞术（FACS）分选阳性细胞，或在动物模型中追踪移植细胞的存活与迁移。
3. 药物筛选与功能研究
构建稳转株后，可通过嘌呤霉素维持筛选压力，确保目的基因稳定表达，适用于长期药物处理实验或基因功能丧失 / 获得性研究。
4. 基因编辑工具载体
作为 CRISPR-Cas9 等基因编辑系统的报告载体，结合 GFP 和 Puro 筛选双阳性细胞，提高编辑效率。
仅用于科研，不能用于临床诊断！所有产品仅供科研使用，不得用于人或动物的治疗等任何其他用途，不为任何个人提供产品和服务。
以实际收货产品说明书为准，网站说明书仅供参考。
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