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LLC-mCherry-Puro稳转株
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品牌名称：$brandModel.Title型号： 原产地：中国大陆 更新时间：2026/10/15 11:08:30
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详细内容
LLC-mCherry-Puro稳转株
英文名称 | LLC-mCherry-Puro polyclonal stable cell line |
产品货号 | XY-M1114 |
中文名称 | mCherry 标记的 LLC 稳转株 |
Lot number | LLC-10C1P |
细胞规格 | 复苏细胞 (T25细胞瓶) 或1 × 106 细胞冻存细胞 |
细胞形态 | 上皮细胞样 |
生长特性 | 贴壁生长 |
细胞株 构建流程 | （1）构建目的基因过表达慢病毒重组质粒，并包装慢病毒； （2）慢病毒以合适的MOI值转导靶细胞； （3）用最佳浓度药物对细胞株进行筛选，获得混合稳转株； （4）稳转株质检（COA）。 |
完全培养基 | DMEM-H + 10％ FBS + 1% P/S（选择添加） |
培养条件 | (1) 气相：95%空气，5% CO2；(2) 温度：37 ℃。 |
细胞冻存 | 无血清冻存液 |
存储条件 | 液氮 |
基本概念
LLC 细胞：通常指小鼠 Lewis 肺癌细胞（Lewis Lung Carcinoma Cells），是一种常用于肿瘤研究的细胞系，具有高转移性和侵袭性特点。
mCherry：一种红色荧光蛋白（Red Fluorescent Protein, RFP），源于珊瑚，常用于细胞标记和追踪，通过荧光显微镜可直接观察细胞分布和状态。
Puro：嘌呤霉素（Puromycin），是一种抗生素，常用于筛选成功转入外源基因的细胞（稳转株构建中作为筛选标记）。
稳转株：通过基因工程技术将目标基因（如荧光蛋白基因）稳定整合到细胞基因组中，使细胞能长期稳定表达目标蛋白的细胞株。
构建流程与原理
载体构建
将 mCherry 基因 和 Puro 抗性基因 克隆到同一质粒载体中，形成重组表达载体（如慢病毒载体、逆转录病毒载体等）。
载体需包含启动子（如 CMV）驱动基因表达，并带有筛选标记（Puro 抗性基因）。
细胞转染 / 感染
通过病毒感染（慢病毒常用）或化学转染方法将重组载体导入 LLC 细胞。
病毒感染效率高，尤其适用于难转染的细胞类型，可实现外源基因稳定整合到基因组。
嘌呤霉素筛选
转染后细胞在含嘌呤霉素的培养基中培养，未成功整合载体的细胞因无抗性而死亡，存活细胞为稳定表达 mCherry 和 Puro 抗性的稳转株。
需预先优化嘌呤霉素浓度（通过杀伤曲线确定最小致死浓度），避免浓度不足导致假阳性或过高导致细胞全部死亡。
单克隆化与鉴定
通过有限稀释法或流式细胞术（FACS）筛选单克隆细胞，确保稳转株遗传背景均一。
鉴定方法：
荧光显微镜观察：检测 mCherry 荧光表达强度及均一性。
Western blot：验证 mCherry 蛋白表达水平。
基因组 PCR：确认外源基因整合到细胞基因组中。
仅用于科研，不能用于临床诊断！所有产品仅供科研使用，不得用于人或动物的治疗等任何其他用途，不为任何个人提供产品和服务。
以实际收货产品说明书为准，网站说明书仅供参考。
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