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TM3-GFP-Puro稳转株
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品牌名称：$brandModel.Title型号： 原产地：中国大陆 更新时间：2026/10/16 11:04:23
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详细内容
TM3-GFP-Puro稳转株
英文名称 | TM3-GFP-Puro polyclonal stable cell line |
产品货号 | XY-M1171 |
中文名称 | GFP 标记的 TM3 稳转株 |
Lot number | TM3-10A1P |
细胞规格 | 复苏细胞 (T25细胞瓶) 或1 × 106 细胞冻存细胞 |
细胞形态 | 上皮细胞样 |
生长特性 | 贴壁生长 |
细胞株 构建流程 | （1）构建目的基因过表达慢病毒重组质粒，并包装慢病毒； （2）慢病毒以合适的MOI值转导靶细胞； （3）用最佳浓度药物对细胞株进行筛选，获得混合稳转株； （4）稳转株质检（COA）。 |
完全培养基 | DMEM / F12 (1 : 1) ，92.5%；马血清，5%；优质胎牛血清，2.5% + 1% P/S（选择添加） |
培养条件 | (1) 气相：95%空气，5% CO2；(2) 温度：37 ℃。 |
细胞冻存 | 无血清冻存液 |
存储条件 | 液氮 |
TM3-GFP-Puro 稳转株概述
TM3 细胞是源自小鼠睾丸间质细胞的永生化细胞系，常用于生殖生物学、内分泌学等研究（如睾酮合成机制）。**GFP（绿色荧光蛋白）** 作为报告基因，便于通过荧光显微镜或流式细胞术追踪细胞。**Puro（嘌呤霉素）** 是一种抗生素，用于筛选成功整合外源基因的稳转细胞株。
构建流程
载体构建
将 GFP 基因与目的基因（如需共表达的其他基因）插入含Puro 抗性基因的载体（如慢病毒或逆转录病毒载体）。
载体需包含启动子（如 CMV）以驱动 GFP 表达。
细胞转染 / 感染
通过脂质体转染或病毒感染（如慢病毒）将载体导入 TM3 细胞。
病毒感染效率更高，适用于难转染的细胞类型。
抗生素筛选
转染后加入嘌呤霉素培养，未成功整合载体的细胞死亡，存活细胞为稳转株。
需预实验确定合适的筛选浓度（通常为 1-10 µg/mL）。
单克隆化与鉴定
通过有限稀释法或流式细胞术分选单克隆细胞，确保基因稳定表达。
验证方法：
荧光检测：显微镜观察 GFP 阳性率（应接近 100%）。
Western blot：检测 GFP 蛋白表达水平。
功能验证：如目的基因相关通路活性检测（如睾酮分泌能力）。
应用场景
细胞示踪与成像
利用 GFP 荧光追踪 TM3 细胞在体内外的迁移、分化或相互作用（如与支持细胞共培养）。
示例：研究睾丸间质细胞在损伤修复中的动态分布。
基因功能研究
过表达或敲低目的基因（如类固醇合成相关酶），结合 GFP 标记筛选稳定克隆，分析基因对 TM3 细胞功能的影响（如睾酮合成量变化）。
药物筛选模型
构建携带疾病相关基因的稳转株，用于筛选调控睾丸间质细胞功能的药物（如治疗性腺功能减退的化合物）。
仅用于科研，不能用于临床诊断！所有产品仅供科研使用，不得用于人或动物的治疗等任何其他用途，不为任何个人提供产品和服务。
以实际收货产品说明书为准，网站说明书仅供参考。
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