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H22-GFP-Puro稳转株
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品牌名称：$brandModel.Title型号： 原产地：中国大陆 更新时间：2026/10/15 11:08:30
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详细内容
H22-GFP-Puro稳转株
英文名称 | H22-GFP-Puro polyclonal stable cell line |
产品货号 | XY-M1116 |
中文名称 | GFP 标记的 H22 稳转株 |
Lot number | H22-10A1P |
细胞规格 | 复苏细胞 (T25细胞瓶) 或1 × 106 细胞冻存细胞 |
细胞形态 | 淋巴母细胞样 |
生长特性 | 半悬浮半贴壁生长 |
细胞株 构建流程 | （1）构建目的基因过表达慢病毒重组质粒，并包装慢病毒； （2）慢病毒以合适的MOI值转导靶细胞； （3）用最佳浓度药物对细胞株进行筛选，获得混合稳转株； （4）稳转株质检（COA）。 |
完全培养基 | RPMI-1640 + 10% FBS + 1% P/S（选择添加） |
培养条件 | (1) 气相：95%空气，5% CO2；(2) 温度：37 ℃。 |
细胞冻存 | 无血清冻存液 |
存储条件 | 液氮 |
一、基本概念
细胞背景
H22 细胞：来源于小鼠肝癌细胞系，具有恶性增殖能力，常用于肝癌动物模型（如小鼠皮下移植瘤模型）的构建。
GFP 标记：绿色荧光蛋白（Green Fluorescent Protein, GFP）通过基因转染整合到细胞基因组中，使细胞在荧光显微镜下发出绿色荧光，便于实时追踪细胞位置、观察细胞形态或监测基因表达。
Puro 抗性：嘌呤霉素（Puromycin, Puro）抗性基因与 GFP 共表达，使细胞在含有嘌呤霉素的培养基中存活，用于筛选成功转染的细胞克隆（稳转株筛选）。
稳转株定义
指通过质粒转染、病毒感染（如慢病毒）等方式将外源基因（如 GFP）稳定整合到细胞基因组中，并能在传代过程中持续表达的细胞株。
二、构建流程
载体设计
构建含 GFP 基因和 Puro 抗性基因的表达载体（如质粒），通常两者由同一启动子驱动，实现共表达。
示例载体结构：启动子→GFP 基因→IRES（内部核糖体进入位点）→Puro 抗性基因→终止子。
转染 / 感染
化学转染：利用脂质体等试剂将载体导入 H22 细胞（适用于易转染细胞）。
病毒感染：常用慢病毒或逆转录病毒载体，感染效率高，适用于难转染细胞。病毒载体需提前包装，携带 GFP 和 Puro 抗性基因进入细胞。
筛选与鉴定
药物筛选：转染 / 感染后，用嘌呤霉素处理细胞，未成功整合抗性基因的细胞死亡，存活细胞为阳性克隆。
单克隆化：通过有限稀释法或流式细胞分选（FACS）获得单细胞克隆，确保 GFP 表达均一性。
鉴定方法：
荧光显微镜观察 GFP 表达强度和细胞形态。
Western blot 检测 GFP 蛋白水平。
测序验证外源基因整合位点。
三、应用场景
体内成像研究
将 H22-GFP-Puro 细胞接种到小鼠体内（如皮下、肝原位），通过活体荧光成像技术（IVIS）实时监测肿瘤生长、转移及药物疗效。
优势：非侵入性、可动态追踪，避免传统组织切片的局限性。
细胞示踪与迁移分析
在体外培养或共培养体系中，利用 GFP 荧光标记观察细胞间相互作用、迁移路径或侵袭能力（如 Transwell 实验）。
基因功能研究
作为工具细胞株，用于过表达或敲低目标基因（需结合 CRISPR-Cas9 等技术），通过 GFP 和 Puro 抗性筛选稳定克隆，研究基因对细胞增殖、凋亡、代谢等表型的影响。
药物筛选与毒性评估
利用稳转株的均一性，高通量筛选抗肿瘤药物，通过荧光强度或细胞存活率评估药物效果。
仅用于科研，不能用于临床诊断！所有产品仅供科研使用，不得用于人或动物的治疗等任何其他用途，不为任何个人提供产品和服务。
以实际收货产品说明书为准，网站说明书仅供参考。
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