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YAC-1-GFP-Puro稳转株
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品牌名称：$brandModel.Title型号： 原产地：中国大陆 更新时间：2026/10/15 11:08:30
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详细内容
YAC-1-GFP-Puro稳转株
英文名称 | YAC-1-GFP-Puro polyclonal stable cell line |
产品货号 | XY-M1105 |
中文名称 | GFP 标记的 YAC-1 稳转株 |
Lot number | YAC-1-10A1P |
细胞规格 | 复苏细胞 (T25细胞瓶) 或1 × 106 细胞冻存细胞 |
细胞形态 | 淋巴母细胞样 |
生长特性 | 悬浮生长 |
细胞株 构建流程 | （1）构建目的基因过表达慢病毒重组质粒，并包装慢病毒； （2）慢病毒以合适的MOI值转导靶细胞； （3）用最佳浓度药物对细胞株进行筛选，获得混合稳转株； （4）稳转株质检（COA）。 |
完全培养基 | RPMI-1640 + 10%FBS + 1% P/S（选择添加） |
培养条件 | (1) 气相：95%空气，5% CO2；(2) 温度：37 ℃。 |
细胞冻存 | 无血清冻存液 |
存储条件 | 液氮 |
YAC-1-GFP-Puro 稳转株概述
YAC-1 细胞是一种源自小鼠的淋巴瘤细胞系，常用于免疫学和肿瘤学研究（如自然杀伤细胞活性检测）。稳转株是指通过基因工程技术将外源基因稳定整合到细胞基因组中，使其能在传代过程中持续表达的细胞株。
关键组成部分：
GFP（绿色荧光蛋白）
作为报告基因，用于直观监测细胞中外源基因的表达情况。通过荧光显微镜或流式细胞术可直接观察到 GFP 阳性细胞，便于筛选和追踪。
Puro（嘌呤霉素）
作为筛选标记基因，赋予细胞对嘌呤霉素的抗性。在稳转株构建过程中，未成功整合外源基因的细胞会被嘌呤霉素杀死，从而筛选出稳定表达目的基因的细胞株。
构建流程与技术要点：
载体构建
将 GFP 基因和 Puro 抗性基因插入到合适的载体（如逆转录病毒载体、慢病毒载体）中，形成重组质粒。
载体需包含启动子（如 CMV）以驱动基因表达，并确保 GFP 和 Puro 抗性基因的共表达。
细胞转染 / 感染
通过脂质体转染、电穿孔或病毒感染（如慢病毒）将重组载体导入 YAC-1 细胞。
病毒感染效率通常更高，尤其适用于难转染的细胞类型。
筛选与单克隆化
转染 / 感染后，用嘌呤霉素处理细胞，未整合抗性基因的细胞死亡，存活细胞为初步筛选的稳转株。
通过有限稀释法或流式细胞术分选单克隆细胞，确保每个克隆源自单个细胞，避免异质性。
鉴定与验证
荧光检测：通过荧光显微镜或流式细胞术确认 GFP 表达率（通常需接近 100%）。
Western blot/RT-PCR：检测目的基因（如 GFP）的蛋白或 mRNA 表达水平，确保稳定遗传。
传代稳定性测试：连续培养数代后，检测 GFP 表达和嘌呤霉素抗性是否持续。
仅用于科研，不能用于临床诊断！所有产品仅供科研使用，不得用于人或动物的治疗等任何其他用途，不为任何个人提供产品和服务。
以实际收货产品说明书为准，网站说明书仅供参考。
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