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MFC-RFP-Puro稳转株
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品牌名称：$brandModel.Title型号： 原产地：中国大陆 更新时间：2026/10/15 11:08:30
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详细内容
MFC-RFP-Puro稳转株
英文名称 | MFC-RFP-Puro polyclonal stable cell line |
产品货号 | XY-M1108 |
中文名称 | RFP 标记的 MFC 稳转株 |
Lot number | MFC-10A2P |
细胞规格 | 复苏细胞 (T25细胞瓶) 或1 × 106 细胞冻存细胞 |
细胞形态 | 上皮细胞样 |
生长特性 | 贴壁生长 |
细胞株 构建流程 | （1）构建目的基因过表达慢病毒重组质粒，并包装慢病毒； （2）慢病毒以合适的MOI值转导靶细胞； （3）用最佳浓度药物对细胞株进行筛选，获得混合稳转株； （4）稳转细胞株质检（COA）。 |
完全培养基 | RPMI-1640 + 10% FBS |
培养条件 | (1) 气相：95%空气，5% CO2；(2) 温度：37 ℃。 |
细胞冻存 | 无血清冻存液 |
存储条件 | 液氮 |
一、基础概念解析
1. 核心术语定义
MFC
通常指 小鼠前胃癌细胞系（Mouse Forestomach Carcinoma Cell Line），是一种来源于小鼠前胃的恶性肿瘤细胞，常用于胃癌相关研究（如肿瘤生长、转移机制、药物筛选等）。
RFP
即 红色荧光蛋白（Red Fluorescent Protein），是一种报告基因，表达后可发出红色荧光（激发波长约 558 nm，发射波长约 583 nm）。通过基因工程手段将 RFP 基因导入细胞，可利用荧光显微镜或流式细胞术等实时追踪细胞位置、观察细胞形态或监测细胞群体动态。
Puro
指 嘌呤霉素（Puromycin），是一种氨基糖苷类抗生素，能通过抑制核糖体功能阻断原核和真核细胞的蛋白质合成。在细胞稳转株构建中，常作为 筛选标记—— 仅携带 嘌呤霉素抗性基因（Puro 抗性基因） 的细胞能在含嘌呤霉素的培养基中存活，未成功导入目的基因的细胞则被淘汰。
稳转株（Stable Cell Line）
指通过基因工程技术将外源基因（如 RFP 基因）稳定整合到细胞基因组中，并能在传代过程中持续表达目标蛋白的细胞株。与瞬转细胞（短期表达外源基因）相比，稳转株可长期稳定表达目的基因，适用于需要持续观察或功能研究的场景。
2. 命名逻辑
MFC-RFP-Puro 稳转株 的命名通常遵循以下规则：
细胞系名称 + 报告基因 + 筛选标记 + 性质（稳转株），即：
基于 MFC 细胞构建，
表达 RFP 荧光蛋白，
通过嘌呤霉素筛选获得稳定整合外源基因的细胞株。
二、构建流程与技术要点
1. 关键步骤
载体构建
构建含有 RFP 基因 和 Puro 抗性基因 的重组质粒（如慢病毒载体、逆转录病毒载体或质粒载体）。
载体中通常包含启动子（如 CMV 启动子）以驱动 RFP 基因的表达。
细胞转染 / 感染
转染：对于易转染的细胞（如部分贴壁细胞），可通过脂质体转染、电穿孔等方法将重组质粒导入 MFC 细胞。
感染：对于难转染的细胞，常用慢病毒或逆转录病毒包装系统，通过病毒感染将外源基因整合到细胞基因组中（慢病毒可感染分裂和非分裂细胞，整合效率更高）。
嘌呤霉素筛选
转染 / 感染后，细胞在含嘌呤霉素的培养基中培养（如 2-4 周）。
未成功整合抗性基因的细胞死亡，存活细胞即为稳定表达 RFP 且具有 Puro 抗性的单克隆或多克隆稳转株。
单克隆化与鉴定
通过有限稀释法或流式细胞术分选单克隆细胞，确保每个克隆来源于单个细胞。
鉴定内容包括：
荧光检测：显微镜下观察细胞是否表达 RFP 荧光（红色荧光）。
Western blot：检测 RFP 蛋白的表达水平。
基因组 PCR：验证 RFP 基因是否整合到细胞基因组中。
传代稳定性测试：连续培养数代后，检测荧光表达是否持续稳定。
2. 技术优势
可视化追踪：RFP 荧光信号强且稳定，适用于活体成像、细胞示踪、细胞分选（如 FACS）等。
高效筛选：嘌呤霉素筛选压力强，可快速富集稳转细胞，避免非稳定整合细胞的干扰。
长期稳定性：外源基因整合到基因组中，可随细胞分裂稳定遗传，适合长期实验（如动物体内成瘤实验、药物耐药性研究）。
三、应用场景
1. 肿瘤研究
体内转移模型：将 MFC-RFP-Puro 稳转株注射到小鼠体内（如皮下、原位移植），利用活体荧光成像技术实时观察肿瘤生长、转移路径及药物治疗效果（如肿瘤体积变化、转移灶数量）。
细胞 - 细胞互作：与免疫细胞（如 T 细胞、巨噬细胞）共培养，通过荧光标记区分肿瘤细胞与免疫细胞，研究肿瘤微环境中的细胞相互作用。
2. 药物筛选与毒性评估
在含药培养基中培养稳转株，通过荧光强度或细胞存活率（如 CCK-8、MTT 法）评估药物对肿瘤细胞的增殖抑制或杀伤作用。
结合流式细胞术，分析药物处理后 RFP 阳性细胞比例的变化，判断药物是否影响稳转基因的表达。
3. 基因功能研究
若 RFP 与目标基因（如癌基因、抑癌基因）共表达，可通过荧光定位间接研究目标蛋白的亚细胞分布（如细胞质、细胞核）。
利用 RNA 干扰（shRNA）或 CRISPR-Cas9 技术敲除 / 敲低目标基因时，可同时引入 RFP-Puro 标记，便于筛选和追踪基因编辑细胞。
仅用于科研，不能用于临床诊断！所有产品仅供科研使用，不得用于人或动物的治疗等任何其他用途，不为任何个人提供产品和服务。
以实际收货产品说明书为准，网站说明书仅供参考。
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