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MDCK-GFP-Puro稳转株
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品牌名称：$brandModel.Title型号： 原产地：中国大陆 更新时间：2026/10/15 11:08:17
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详细内容
MDCK-GFP-Puro稳转株
英文名称 | MDCK-GFP-Puro polyclonal stable cell line |
产品货号 | XY-O1107 |
中文名称 | GFP 标记的 MDCK 稳转株 |
Lot number | MDCK-10A1P |
细胞规格 | 复苏细胞 (T25细胞瓶) 或1 × 106 细胞冻存细胞 |
细胞形态 | 上皮细胞样 |
生长特性 | 贴壁生长 |
细胞株 构建流程 | （1）构建目的基因过表达慢病毒重组质粒，并包装慢病毒； （2）慢病毒以合适的MOI值转导靶细胞； （3）用最佳浓度药物对细胞株进行筛选，获得混合稳转株； （4）稳转株质检（COA）。 |
完全培养基 | MEM + 10％ FBS + 1% P/S（选择添加） |
培养条件 | (1) 气相：95%空气，5% CO2；(2) 温度：37 ℃。 |
细胞冻存 | 无血清冻存液 |
存储条件 | 液氮 |
MDCK-GFP-Puro 稳转株概述
MDCK 细胞是犬肾上皮细胞（Madin-Darby Canine Kidney Cells）的简称，常用于病毒学研究（如流感病毒复制机制）、细胞生物学研究及药物转运模型构建。
GFP（绿色荧光蛋白）是常用的报告基因，通过荧光标记可直观观察细胞状态、定位或示踪。
Puro（嘌呤霉素）是一种抗生素，用于稳转株筛选 —— 通过质粒转染将含 GFP 和 Puro 抗性基因的载体导入细胞，经嘌呤霉素筛选后，存活细胞即为稳定表达 GFP 的稳转株（MDCK-GFP-Puro 稳转株）。
核心特性与应用
1. 特性
荧光标记：GFP 表达使细胞在荧光显微镜下发出绿色荧光，便于实时观察细胞形态、增殖或迁移等动态过程。
稳定遗传：经嘌呤霉素筛选后，GFP 基因整合至细胞基因组，可长期传代并稳定表达。
抗性筛选：含 Puro 抗性基因，可通过嘌呤霉素维持筛选压力，避免非转染细胞过度生长。
2. 应用场景
病毒感染研究：
观察流感病毒等病原体感染 MDCK 细胞的过程（如病毒复制、细胞病变效应）。
通过 GFP 荧光强度变化量化病毒感染效率。
细胞生物学研究：
追踪细胞在药物处理、信号通路调控下的形态变化或凋亡过程。
用于细胞分选（如流式细胞术筛选高表达 GFP 的单克隆细胞）。
药物转运模型：
MDCK 细胞具有极性上皮特性，可模拟体内屏障（如血脑屏障），GFP 标记有助于评估药物对细胞单层完整性的影响。
构建流程与关键步骤
载体构建：
构建含 GFP 基因和 Puro 抗性基因的表达载体（如质粒），通常采用 CMV 等强启动子驱动 GFP 表达。
细胞转染：
使用脂质体转染、电穿孔等方法将载体导入 MDCK 细胞。
嘌呤霉素筛选：
转染后 48⁻⁷2 小时加入嘌呤霉素（浓度需预实验优化，通常为 0.5-2 µg/mL），未成功整合载体的细胞死亡，存活细胞形成稳转株。
单克隆筛选（可选）：
通过有限稀释法或流式细胞术分选单细胞，获得 GFP 表达均一的单克隆稳转株。
鉴定与扩增：
荧光显微镜观察 GFP 表达效率，Western blot 验证蛋白水平，扩大培养后冻存备用。
仅用于科研，不能用于临床诊断！所有产品仅供科研使用，不得用于人或动物的治疗等任何其他用途，不为任何个人提供产品和服务。
以实际收货产品说明书为准，网站说明书仅供参考。
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